厚壳贻贝足腺多酚蛋白的提取方法及快速检测方法

摘要

本发明涉及一种贻贝足腺黏附蛋白的提取及其快速检测方法，用醋酸-尿素抽提结合还原剂的使用从厚壳贻贝足腺中提取黏附蛋白粗品，通过反相高效液相色谱结合氯化硝基四氮唑蓝(NBT)特异性染色来鉴别富含DOPA的贻贝粘蛋白组分，从而有效地提高了厚壳贻贝足腺粗蛋白中富含DOPA的多酚黏附蛋白的收率。本发明提取方法简单、易操作且成本较低，检测方法快速，并在液相条件下可以直接检测DOPA含量，较传统方法操作简便，且可以进行DOPA的定量分析，更有助于提高贻贝黏附蛋白提取过程中的命中率和回收率，制得的贻贝足腺黏附蛋白可用于生物粘合剂的制备。

主权项

一种贻贝足腺黏附蛋白的提取方法，其特征在于采用醋酸 尿素抽提系统结合还原剂进行提取，包括以下步骤：1)取厚壳贻贝足部清洗除去色素层，剪碎在 5℃～0℃温度下加入含7～9mol/L尿素的4～6(wt)％的醋酸溶液中，另加入0.05～0.15mmol/L的三羧乙基膦作为还原剂；2)将上述组织混合液进行冰浴匀浆；3)把匀浆液离心处理，取上清液；4)把得到的上清液按体积比1∶2±0.2加入预冷的 82℃～ 86℃丙酮，静止20～40分钟，经离心弃上清，收集沉淀，溶于4～6(wt)％的醋酸溶液中，即获得贻贝足腺黏附蛋白粗品；5)最后将上述复溶后的厚壳贻贝足腺黏附蛋白粗品经0.4～0.5μm膜过滤，上样反相高效液相色谱进行脱盐及粗分，收集洗脱峰，冷冻干燥即可。