一种周质分泌融合表达型前T载体及其制备与应用

摘要

本发明提供了一种周质分泌融合表达型前T载体，由如下方法制备得到：(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA 1片段；(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点，在编码氨基酸序列不变的情况下，改变DNA序列，使XcmI识别位点丧失，得到定点突变消除XcmI位点的pET39’；(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中，得到所述周质分泌融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外，不需要用其它限制性内切酶，一步法构建融合表达基因工程菌，为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

主权项

一种周质分泌融合表达型前T载体，由如下方法制备得到：(1)构建DNA1：5’‑ATACTTAAGCGAGAAAAAAGGTTCTGGTTCTGGTCATCATCATCATCACCATGGATCTAATGGATAGGTTAATGTC‑3’；(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点，在编码氨基酸序列不变的情况下，改变DNA序列，使XcmI识别位点丧失，得到定点突变消除XcmI位点的pET39’；(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中，得到所述周质分泌融合表达型前T载体。