特定功能微生物制品的制备方法

摘要

本发明涉及一种特定功能微生物制品的制备方法，利用乳酸菌中的优质乳杆菌经培养得到高活性的乳酸菌发酵液，以脱脂乳等作为保护剂利用真空冷冻干燥机制成活菌数高达1011/克的活菌添加剂。该特定功能微生物添加剂的优点在于经过真空冷冻干燥所得到的乳酸菌活菌添加剂活性高活力强，发酵产物生物学功能稳定，适于工业连续培养且成本低，便于操作等优点。而且既可以直接添加到食品及饮品中也可利用此乳酸菌添加剂发酵食品及饮品，经过该特定功能微生物添加剂发酵所得到的食品或饮品能促进人及动物生长、调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡、而且降解内毒素、抑制肠道内腐败菌生长、提高机体免疫力等，同时对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作用。

主权项

一种特定功能微生物制品的制备方法，其特征是：1)(1)从极端化环境下分离乳酸乳杆菌对所获得得菌株采取极端环境条件的塞选试验：(1)经过50摄氏度耐高温试验；(2)PH3的耐酸试验：PH3的意思是调节培养基的PH值为3的试验；(3)耐高盐试验；(4)对沙门氏杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球的拮抗实验拮抗能力的验证试验；从中选育出的德氏乳杆菌菌株(delbrueckii subsp.Lactis)、干酪乳杆菌菌株(paracasei)短乳杆菌(Lactobacillus brevis)作为工程菌株，挑取工程菌株分别接种到mrs斜面培养基上备用，mrs培养基的组织成分：组成成分 重量(g)牛肉蛋白粉 10鱼肉汁 10酵母浸出汁粉 5葡萄糖 20醋酸钠 5柠檬酸二铵 2吐温80 0.1硫酸镁 0.58硫酸锰 0.28蒸溜水 1000ml固体：琼脂15g备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下：大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g，酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水1000ml，将以上组份溶解于去离子水中，将其装入2l的三角瓶中，在121℃的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入‑4℃的冰箱中待用；3)一次活化培养：将一次活化培养的培养基20ml，分装到100ml培养瓶中，用5ml生理盐水冲洗德氏乳杆菌(delbrueckii subsp.Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)短乳杆菌(Lactobacillus brevis)菌种斜面，将冲洗下来的菌液转种到一次活化培养的培养基中，在温度为36±1℃条件下，厌氧静止培养16~18h，待测定ph值在3.8‑4.5范围时，表明一次活化培养状态达到要求；4)配制二次扩大培养：大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克，去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为4l的小型发酵罐中，在121℃条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5)二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养的培养液中，将温度调到40℃恒温厌养静止培养12‑14h，待发酵液的ph达到3.8‑4.5时，表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂：脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均匀后装到10l的三角瓶中，在118℃条件下高压蒸汽灭菌15min后放入‑4℃的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥：将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在10000rpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有冻干保护剂的10l的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混匀，其中发酵后菌泥与冻干保护剂的比例为1∶3；9)冻干：将混合均匀的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入‑40℃的冰箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干24h，即可以得到活菌数达到1011/克的乳酸菌添加剂。