奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法

摘要

本发明公开了一种奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法，依次包括以下步骤：1)以奶粉为样品进行样品处理；2) 分别以L-肉碱标准品和D-肉碱标准品制备标准溶液；3)将步骤2)所得的L-肉碱标准溶液和D-肉碱标准溶液分别对应地制成梯度浓度的L-肉碱衍生溶液和梯度浓度的D-肉碱衍生溶液；4) 样品溶液衍生化反应；5) 对步骤3)和4)的所得物分别进行高效液相色谱检测；6) 获得L-肉碱的浓度cL和D-肉碱的浓度cD；7) 获得奶粉样品中L-肉碱含量和纯度。采用本发明的方法测定奶粉中的L-肉碱，能大大提高检测灵敏度。

主权项

1.一种奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法，其特征是依次包括以下步骤：1)、样品处理：先将奶粉样品10～20g用去离子水溶解后于50℃水浴15min，再超声波处理10min，接着用去离子水定容至100ml；再分别进行去除乳脂肪和乳蛋白的处理：加入0.1mol/L的盐酸溶液调节pH至1.8～2.2，静置10min后用滤纸过滤；在所得的滤液中加入1mol/L的NaOH溶液调节pH至5.8～6.2，静置10min后用滤纸进行第二次过滤，第二次过滤所得的滤液为样品溶液；2)、制备标准溶液：称取50mg L-肉碱标准品，以去离子水溶解，并定容至10ml；所得溶液经0.45μm滤膜过滤，得到L-肉碱标准溶液；称取50mg D-肉碱标准品，以去离子水溶解，并定容至10ml；所得溶液经0.45μm滤膜过滤，得到D-肉碱标准溶液；3)、将步骤2)所得的L-肉碱标准溶液和D-肉碱标准溶液分别进行如下操作：取30μl的L-肉碱标准溶液/D-肉碱标准溶液放于容量瓶中，加入80μl的0.05M碳酸缓冲液和80μl的1-(9-芴基)-氯甲酸乙酯；将容量瓶放入45℃水浴中放置1h，然后取出容量瓶自然冷却至室温后，向容量瓶中加入去离子水定容至10ml；将定容后的溶液用去离子水稀释，得到L-肉碱/D-肉碱浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml的L-肉碱系列衍生溶液/D-肉碱系列衍生溶液；将所得的L-肉碱系列衍生溶液和D-肉碱系列衍生溶液分别用0.45μm微孔滤膜过滤；分别得梯度浓度的L-肉碱衍生溶液和梯度浓度的D-肉碱衍生溶液；4)、样品溶液衍生化反应：取60μl步骤1)所得的样品溶液于容量瓶中，再加入30μl的0.05M碳酸缓冲液和30μl的1-(9-芴基)-氯甲酸乙酯；将容量瓶放入45℃水浴中放置1h，然后从水浴中取出容量瓶自然冷却至室温后，向容量瓶中加入去离子水定容至10ml；将定容后的溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，得进样液；5)、高效液相色谱法检测：对步骤3)所得的梯度浓度的L-肉碱衍生溶液和梯度浓度的D-肉碱衍生溶液以及步骤4)所得的进样液分别进行高效液相色谱检测；检测条件如下：选用C18色谱柱，色谱条件为：流动相为：三乙胺磷酸缓冲液∶乙腈＝73∶27的体积比；流速：1ml/min；检测波长：发射波长269nm，检测波长310nm；进样量：10μl；分别得梯度浓度的L-肉碱衍生溶液的响应峰面积、梯度浓度的D-肉碱衍生溶液的响应峰面积、进样液的响应峰面积；6)、获得L-肉碱的浓度cL和D-肉碱的浓度cD：以步骤5)所得的梯度浓度的L-肉碱衍生溶液的响应峰面积对浓度作图，得L-肉碱的标准曲线；以步骤5)所得的梯度浓度的D-肉碱衍生溶液的响应峰面积对浓度作图，得D-肉碱的标准曲线；将步骤5)所得的进样液的响应峰面积分别与上述L-肉碱的标准曲线和D-肉碱的标准曲线对比，所得的结果乘以样品溶液在步骤4)的衍生反应中的稀释倍数10*1000/60，从而分别得样品溶液中L-肉碱的浓度cL和D-肉碱的浓度cD；7)、获得奶粉样品中L-肉碱含量和纯度：式中：cL——样品溶液中L-肉碱的浓度，μg/ml；m——奶粉的质量，g；式中：cL——样品溶液中L-肉碱的浓度，μg/ml；cD——样品溶液中D-肉碱的浓度，μg/ml。