卷烟烟气遗传毒性的体外细胞微核检测方法

摘要

一种卷烟烟气遗传毒性的体外细胞微核检测方法，其特征在于：以永生化人支气管上皮细胞为靶细胞，烟气冷凝物染毒处理，细胞经低渗、高渗处理，并经两种荧光探针染色，流式细胞仪分析。本发明与现有技术相比的优点如下：1.克服了凋亡细胞对微核检测的影响，降低了假阳性结果。2.由于采用体外细胞培养，克服了体内微核检测(动物试验)的不确定性。3.采用6孔板细胞培养，流式细胞仪检测，可满足高通量微核检测要求。4.经2500×g梯度离心，排除了线粒体、非特异性(碎片)颗粒等的干扰。因此本发明提高了检测方法的敏感性，实验结果的准确性，客观性以及可靠性。

主权项

一种卷烟烟气遗传毒性的体外细胞微核检测方法，其特征在于：以永生化人支气管上皮细胞为靶细胞，烟气冷凝物染毒处理，细胞经低渗、高渗处理，并经两种荧光探针染色，流式细胞仪分析，具体步骤包括：指数生长期细胞，烟气冷凝物染毒处理，收集细胞进行处理，经EMA探针染色，洗涤后，低渗溶液膨胀细胞，并对细胞膜打孔处理，RNase A水解RNA，SYTOX与DNA结合，加入高渗溶液，破碎细胞膜，释放细胞核，SYTOX与DNA结合，梯度离心2500×g、15min后，进行流式细胞仪分析。