一种获得转基因棉花的方法

摘要

本发明公开了一种获得转基因棉花的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)切除棉花子叶苗的子叶、叶柄和部分下胚轴，下胚轴保留1-3cm，得到待侵染组织；25-30℃、相对湿度40％-60％、暗培养2-3天；(2)从茎尖顶部至下胚轴基部双面划伤，伤口深0.8-1.2mm；(3)在溶液A中浸染15-45分钟；溶液A中含携带外源基因的重组农杆菌；(4)共培养2-4天，然后进行抗性筛选，得到抗性棉花苗；(5)将抗性棉花苗嫁接在棉花砧木上，得到转基因棉花。本发明通过调整茎尖生长状态、确定农杆菌转化的茎尖侵染合适深度、加入乙酰丁香酮并调整适宜的pH值，提高转化效率。利用本发明的方法可以快速获得转基因植株且具有较高的转基因效率。

主权项

一种获得转基因棉花的方法，包括如下步骤：(1)切除棉花子叶苗的子叶、叶柄和部分下胚轴，下胚轴保留0.8‑3cm的长度，得到待侵染组织；然后25‑30℃、相对湿度40％‑60％、暗培养2‑3天；所述子叶苗为子叶半展开、下胚轴伸长至4‑6cm的无菌苗；(2)将暗培养后的待侵染组织双面划伤，划伤范围为从茎尖顶部至下胚轴基部，伤口深0.8‑1.2mm；(3)将划伤的待侵染组织在溶液A中浸染15‑45分钟；所述溶液A中含有携带外源基因的重组农杆菌；(4)侵染完成后共培养2‑4天，然后进行抗性筛选，得到抗性棉花苗；(5)将抗性棉花苗嫁接在棉花砧木上，得到转基因棉花；步骤(3)中，所述溶液A的pH为5.3‑5.8，由溶质和水组成；所述溶液A的溶质及其浓度如下：乙酰丁香酮40‑120μl·L‑1，2‑N‑吗啉乙烷磺酸65‑85mM、葡萄糖2‑3％(质量百分含量)、激动素0.08‑0.12mg·L‑1、含有外源基因的重组农杆菌OD600＝0.6‑0.8。