人源S100A4蛋白的纯化与鉴定

摘要

本发明公开了一种人源S100A4蛋白的纯化与鉴定方法。本发明采用离子交换层析法对表达载体pET32a-S100A4的表达产物纯化后，进行SDS-PAGE鉴定和Western-Blot鉴定。为了加快纯化速度，防止蛋白在纯化过程中降解，采用透析法进行脱盐处理。

主权项

权利要求1所述的人源S100A4蛋白的纯化与鉴定，其特征在于包括如下步骤：(1)S100A4蛋白的纯化①将离子交换层析柱HiTrapTM DEAE FF(GE Health)以约5倍体积的起始缓冲液平衡。②平衡以后，将破碎上清以起始缓冲液稀释3‑5倍以0.45μm的除菌滤器过滤除菌后，以5mL/min的流速注射器手推上样，收集穿透液。③以起始缓冲液平衡层析柱，用不同浓度梯度的洗脱缓冲液进行洗脱，以1.5mL/管收集，进行SDS‑PAGE鉴定和纯度鉴定。(2)S100A4蛋白的脱盐采用透析的方法进行脱盐处理，简言之，透析袋中盛有人源S100A4蛋白溶液，再将透析袋放入生理盐水中，在4℃环境下透析24小时后，进行SDS‑PAGE分析。(3)蛋白鉴定a SDS‑PAGE鉴定①将上一步骤中收集的破碎后上清液吸取25μl，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；②取破碎后的沉淀少许，加入25μl的超纯水重悬后，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；③将上述两者100℃煮沸5min，并短暂离心，进行SDS‑PAGE电泳，鉴定其表达形式。b Western‑Blot鉴定按照常规Western‑Blot法操作规程操作，以山羊抗S100A4(来源：Santa cruz公司)为一抗，进行鉴定所表达的S100A4蛋白。