检测芯片的制备方法及利用该芯片检测病原体的方法

摘要

本发明公开了一种检测芯片的制备方法，包括以下步骤：1)设计细菌的寡核苷酸探针；2)芯片制备。本发明还同时公开了利用上述检测芯片检测多个食品样本中病原体的方法，包括以下步骤：1)设计引物；2)待测样品中DNA的提取，得提取液；3)靶基因的多重PCR扩增；4)芯片杂交检测；5)杂交结果的检测与分析。本发明的检测方法步骤简洁、易于操作，且检测结果正确率高。

主权项

一种检测芯片的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、设计细菌的寡核苷酸探针：每种细菌至少含两条探针，各探针利用常规软件进行设计，每条探针均必须符合以下条件：长度为50～60mer，Tm值差异在5度之内，各探针内部发夹结构≤5个、GC含量为40％～55％、重复的单一碱基的连续≤5个，分子最稳定的二级结构配对碱基长度少于6bp；大肠菌群的探针至少含SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4中的任意2种；乳酸菌的探针至少含SEQ ID NO：5～SEQ ID NO：8中的任意2种；沙门氏菌的探针至少含SEQ ID NO：9～SEQ ID NO：13中的任意2种；志贺氏菌的探针至少含SEQ IDNO：14～SEQ IDNO：15中的任意2种；金黄色葡萄球菌的探针至少含SEQ ID NO：16～SEQ ID NO：20中的任意2种；霉菌的探针至少含SEQ ID NO：21～SEQ ID NO：24中的任意2种；酵母的探针至少含SEQ ID NO：25～SEQ ID NO：28中的任意2种；2)、芯片制备：将步骤1)所得的探针与Corning print buffer等体积比混合后，利用点样仪点制芯片；将所得的芯片在预杂交液进行预杂交，再清洗、干燥后；得检测芯片；所述预杂交液由20×SSC 100ml、10％SDS 4ml、10％BSA 40ml和dd H2O 276ml组成。