表达人组织激肽释放酶的转基因莱茵衣藻的构建方法

摘要

本发明为一种表达人组织激肽释放酶的转基因莱茵衣藻的构建方法，首先根据人组织激肽释放酶基因序列和莱茵衣藻偏爱密码子表，设计适合于莱茵衣藻核基因组表达或叶绿体基因组表达或线粒体基因组表达的人组织激肽释放酶基因序列，并通过人工合成的方法合成该基因序列及人工合成含有非编码序列的人组织激肽释放酶基因，然后构建含有上述外源目的基因的莱茵衣藻核表达载体或莱茵衣藻叶绿体表达载体或莱茵衣藻线粒体表达载体，再通过遗传转化方法，转化到莱茵衣藻中，经过筛选，获得能表达人组织激肽释放酶的转基因工程藻株。本发明为利用转人源激肽释放酶基因莱茵衣藻及其加工产品对某些疾病如高血压、肾小球肾炎等进行预防和治疗奠定了基础。

主权项

一种表达人组织激肽释放酶的转基因莱茵衣藻的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)转基因受体藻株的选择与培养；(2)人工合成外源目的基因‑‑‑‑适合于莱茵衣藻(Chlamydonomas reinhardtii)表达的人组织激肽释放酶基因：根据人组织激肽释放酶基因序列和莱茵衣藻基因组偏爱密码子表，对人组织激肽释放酶基因进行密码子替换，设计适合于莱茵衣藻表达的人组织激肽释放酶基因，并通过人工合成的方法合成该基因；所述适合于莱茵衣藻表达的人组织激肽释放酶基因为适合于莱茵衣藻核表达的人组织激肽释放酶基因、适合于莱茵衣藻叶绿体表达的人组织激肽释放酶基因或适合于莱茵衣藻线粒体表达的人组织激肽释放酶基因，所述适合于莱茵衣藻核表达的人组织激肽释放酶基因为具有SEQ IDNO.1所述核苷酸序列的cKKn基因或具有SEQID NO.2所述核苷酸序列的cKKit1基因，所述适合于莱茵衣藻叶绿体表达的人组织激肽释放酶基因为具有SEQ ID NO.3所述核苷酸序列的cKKch1基因，所述适合于莱茵衣藻线粒体表达的人组织激肽释放酶基因为具有SEQ IDNO.4所述核苷酸序列的cKKmt基因；(3)构建含有第(2)步所述外源目的基因的人组织激肽释放酶基因衣藻表达载体：所述人组织激肽释放酶基因衣藻表达载体为人组织激肽释放酶基因衣藻核表达载体、人组织激肽释放酶基因衣藻叶绿体表达载体或人组织激肽释放酶基因衣藻线粒体表达载体；(4)人组织激肽释放酶基因表达载体的遗传转化；(5)转基因莱茵衣藻的筛选。