两核苷酸同时合成DNA测序方法及其应用

摘要

两核苷酸同时合成DNA测序方法及其应用，待测核酸序列由标记的核苷酸dATP、dGTP、dCTP、dUTP按照一定组合分成三组对同一模板进行三次测序：每组测序由包含四个标记的核苷酸dATP、dGTP、dCTP、dUTP，按照每个核苷酸在一个循环中只使用一次的方式，进行两次由两个不同标记核苷酸同时合成测序反应的循环，每进行一次测序反应得到由核苷酸(碱基)片段构成的一个编码，若干次测序反应后得到由一组若干编码构成的核酸序列信息；当该组测序反应完成后，通过变性将测序引物延伸链清除，重新杂交测序引物，进行下一组测序反应，最后将三组测序反应获得的三组编码信息，通过解码转化成对应的三组核苷酸(碱基)片段信息，并通过比较三组核苷酸(碱基)信息组装出待测核酸序列的具体碱基信息。

主权项

一种两核苷酸同时合成DNA测序方法，其特征在于待测核酸序列由标记的核苷酸dATP、dGTP、dCTP和dUTP按照一定组合分成三组对同一模板进行三次测序：其中每组测序由包含四个标记的核苷酸dATP、dGTP、dCTP、dUTP，按照每个核苷酸在一个循环中只使用一次的方式，进行两次由两个不同标记核苷酸同时合成测序反应的循环，每进行一次合成测序反应得到由核酸片段构成的一个编码，核酸片段的编码包括按照核苷酸的标记物和标记物的强度进行，一个序列片段对应一个编码，并用一个专属的符号表示，编码包括单个标记物对应的单个碱基字符、由两个不同标记物构成的两个碱基字符串，称之为母码，表示标记物或者碱基的种类码；以及由标记物强度反映的核苷酸个数构成，称之为子码，表示标记物强度对应的碱基个数码；若干次测序反应后得到由若干个编码构成的核酸序列信息;当该组测序反应完成后，通过变性将测序引物延伸链清除，重新杂交测序引物，进行下一组测序反应；最后将三组测序反应获得的三组编码信息，通过解码转化成对应的三组核苷酸(碱基) 片段信息，并通过比较三组核酸片段信息组装出待测核酸序列的具体碱基信息。