在糖工程化的酵母巴斯德毕赤酵母中对半乳糖同化途径的代谢工程化

摘要

描述了通常不能利用半乳糖作为碳源但根据本文的方法已被基因工程化为利用半乳糖作为单一碳源的低等真核细胞例如巴斯德毕赤酵母。细胞被基因工程化为表达包含Leloir途径的酶中的几种。具体地，细胞被基因工程化为表达半乳糖激酶、UDP-半乳糖-C4-差向异构酶和半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶，以及任选地半乳糖通透酶。另外，提供了用于改进在已被基因工程化为产生具有N-聚糖(其具有半乳糖残基)的糖蛋白但通常缺乏包含Leloir途径的酶的细胞中具有半乳糖末端的或含有半乳糖的N-聚糖的产量的方法，所述方法包括用编码半乳糖激酶、UDP-半乳糖-C4-差向异构酶和半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶的一种或多种核酸分子转化细胞。描述的方法和宿主细胞使得同化半乳糖的能力的存在或缺乏作为用于制备重组细胞的选择方法。所述方法和宿主细胞在本文显示对于制备具有半乳糖末端的或含有半乳糖的N-聚糖的免疫球蛋白和类似物是特别有用的。

主权项

一种巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)宿主细胞，其已被基因工程化为表达半乳糖激酶活性、UDP 半乳糖 4 差向异构酶活性、半乳糖 1 磷酸尿苷酰转移酶活性以及任选地半乳糖通透酶活性，其中所述宿主细胞能够利用半乳糖作为单一碳能源。