| 摘要 |
1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPA-OPRF, кодирующая синтез рекомбинантного OprF P.aeruginosa, размером 4478 пар оснований, содержащая: XbaI-EcoRI фрагмент ДНК размером 87 пар оснований, содержащего последовательность модифицированного промотора бактериофага Т5 и двух лактозных оперонов; EcoRI-BamHI фрагмент ДНК размером 57 пар оснований, содержащего сайт посадки рибосомы, стартовый ATG-кодон и последовательность, кодирующую шесть гистидинов (Arg-Gly-Ser-His-His-His-His-His-His-Gly-Ser); BamHI-HindIII фрагмент ДНК размером 1059 пар оснований, содержащего последовательность гена Oprf P.aeruginosa, полученного с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР); EcoRI-HindIII фрагмент ДНК размером 1116 пар оснований, содержащего сайт посадки рибосомы и последовательность, кодирующую рекомбинантный OprF (состоит из гистидиновой последовательности и собственно белка OprF); HindIII-NhEI фрагмента ДНК размером 1116 пар оснований, содержащего лямбда t0 регион остановки транскрипции. ! 2. Штамм бактерий E.coli PA-OPRF - продуцент рекомбинантного OprF P.aeruginosa, полученный путем трансформации родительского штамма бактерий Escherichia coli M 15 рекомбинантной плазмидной ДНК pPA-OPRF. ! 3. Способ получения рекомбинантного OprF P.aeruginosa с использованием трансформированного методами генетической инженерии штамма E.coli, включающий его культивирование в питательной среде, разрушение клеток микроорганизма, очистку полученного продукта с использованием аффинной хроматографии на никель-активированных сорбентах и растворением с ренатурацией очищенного препарата в нативных условиях при помощи ступенчатого диализа. |
