一种鱼类病原菌海豚链球菌分子诊断试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开一种鱼类病原菌海豚链球菌(Streptococcus iniae)分子诊断试剂盒及检测方法。本发明内容包括裂解缓冲液A、DNA提取B液、DNA提取C液、DNA提取D液、阳性模板对照E液和PCR反应液F液。该试剂盒及检测方法是以海豚链球菌基因组中的保守序列设计的一对特异引物为主体而组成的。同时，本发明还对DNA提取裂解液及PCR反应条件包括镁离子浓度、退火温度、循环数进行了优化。该试剂盒能对鱼类病原菌海豚链球菌的特异DNA片断进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高；还可用于养殖鱼类各个养殖过程的细菌跟踪检测，具有很高的实用价值。

主权项

一种鱼类病原菌海豚链球菌分子诊断试剂盒，其特征是该试剂盒包括下列部件：(1)感染组织裂解buffer A，1管，内装感染组织总DNA提取裂解buffer：20mM Tris‑HCl，5mM EDTA Na2，400mM NaCl，1％SDS，pH 8.0；(2)DNA提取B液，1管，内装蛋白酶K，浓度为10mg/ml；(3)DNA提取C液，1管，内装酚‑氯仿‑异戊醇，体积比为25∶24∶1；(4)DNA提取D液，1管，内装异丙醇；(5)阳性模板对照E液，1管，内装海豚链球菌基因组DNA；(6)PCR反应液F液，1管，内装PCR扩增反应液，包括ddH2O、含Mg2+的10×Buffer、dNTP、引物P1：5’GAAAATAGGAAAGAGACGCAGTGTC3’、P2：5’CCTTATTTCCAGTCTTTCGACCTTC 3’和TaqE；(7)盒子。