从鲨鱼皮分离纯化生物医药用胶原蛋白的方法

摘要

一种从鲨鱼皮中分离纯化生物医学用胶原蛋白的方法。其操作如下：取鲨鱼皮用浓度为10mM，pH值为7.4-7.6的磷酸氢二钠缓冲液浸泡冲洗去掉鳞和残肉，切成小块，用去离子水浸泡冲洗3～5次；清洗干净的鱼皮用原料量五倍的浓度为100mM，pH值为7.4-7.6的磷酸氢二钠缓冲液浸泡70～75小时后，匀浆15min，在温度为4℃，转速10000rpm，离心15min，取上清液；沉淀重复上一步过程，合并上清液，加硫酸铵至饱和度80％，在温度为4℃，转速8000rpm，离心15min，保留沉淀；将沉淀溶在浓度为200mM，pH值为7.0的磷酸缓冲液中；用G-75，G-100，G-150葡聚糖层析上述溶解液，收集蛋白溶出液于温度为4℃，转速10000rpm，离心15min，上清液浓缩，冷冻干燥得生物医学用胶原蛋白。本发明用于从鲨鱼皮中分离纯化生物医学用胶原蛋白的方法。

主权项

一种从鲨鱼皮中分离纯化生物医学用胶原蛋白的方法，其特征在于选取原料为鲨鱼皮，制备方法如下：(1)、将鲨鱼皮用浓度为10mM，pH值为7.4‑7.6的磷酸氢二钠缓冲液浸泡冲洗去掉鳞和残肉，并切成小块，再用去离子水浸泡冲洗3～5次；(2)、清洗干净的鱼皮且用原料量五倍的浓度为100mM，pH值为7.4‑7.6的磷酸氢二钠缓冲液浸泡70～75小时后，匀浆15min，在温度为4℃，转速为10000rpm，离心15min，取上清液；(3)、再沉淀重复(2)的过程一次，合并上清液，加硫酸铵至饱和度80％，在温度为4℃，转速为8000rpm，离心15min，保留沉淀；(4)、将沉淀溶在浓度为200mM，pH值为7.0的磷酸缓冲液中；(5)、用G‑75，G‑100，G‑150葡聚糖层析上述溶解液，收集蛋白溶出液于温度为4℃，转速为10000rpm，离心15min，上清液浓缩，冷冻干燥后得到生物医学用胶原蛋白。