一种抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法，将鸭病毒性肝炎接种与鸡胚尿囊腔中进行增殖，从中提取病毒抗原；然后将提取的病毒抗原在健康猪机体上进行免疫，再从免疫猪的脾脏上提取得到抗鸭病毒性肝炎转移因子。本发明采用鸭病毒性肝炎病毒提取特异性转移因子，该转移因子能够有效的抑制鸭病毒性肝炎病毒，能够保护正常机体细胞免受鸭病毒性肝炎病毒的感染，从根本上预防鸭病毒性肝炎的发生。另外，本发明的制备方法简单易行，生产时间短，成本低，具有很好的应用前景。

主权项

1.一种抗鸭病毒性肝炎转移因子的制备方法，其特征在于：将鸭病毒性肝炎接种与鸡胚尿囊腔中进行增殖，从中提取病毒抗原；然后将提取的病毒抗原在健康猪机体上进行免疫，再从免疫猪的脾脏上提取得到抗鸭病毒性肝炎转移因子，具体步骤如下：1)鸭肝炎病毒抗原的制备：将鸭病毒性肝炎接种于9日龄-10日龄的鸡胚尿囊腔中进行增殖，33-37℃，培养72-96h，取鸡胚尿囊液，装入经灭菌消毒的离心管中，超声波处理后离心，弃去沉淀取上清，得到粗病毒抗原；2)病毒抗原的提取：在离心管中依次小心铺设20%-66%不同浓度梯度的蔗糖溶液，然后在溶液液面上加粗抗原，粗抗原的加入量为每个梯度蔗糖溶液体积的20%，经离心处理，小心吸出在蔗糖梯度层中出现的病毒带，透析除去蔗糖得到病毒抗原；3)病毒抗原免疫猪：挑选健康免疫猪，用上述提取的病毒抗原进行皮下多点注射免疫，免疫至少4次，每次免疫间隔一周，最后一次免疫7-10天后，取脾脏冷冻保存待用；4)从免疫猪的脾脏中提取抗鸭病毒性肝炎转移因子：将免疫猪的脾脏除去表面的筋膜、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗，然后将脾脏剪碎，加入2倍-4倍体积的生理盐水，在低于10℃的条件下用高速组织捣碎机捣碎制得猪脾脏匀浆液；将猪脾脏匀浆液进行超声波处理，在-60℃～-80℃快速冷冻，水浴30℃-37℃融化，交替冻融4~6次，每次融化后都用组织匀浆高速匀浆粉碎；然后加入2倍体积的冰冻生理盐水，离心取上层血红色的液体，再用砂心漏斗过滤，取滤液；将滤液用盐酸调pH值至5.0-6.0，上清液先用0.2μm中空纤维柱过滤，滤出液再用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维柱超滤，收集滤出液，将所得的滤液用0.22μm滤膜进行无菌过滤，即得到抗鸭病毒性肝炎转移因子。