一种利用内酯酶制备光学纯2-羟基-4-苯基丁酸的方法

摘要

本发明公开了一种化学-酶法制备光学纯2-羟基-4-苯基丁酸的新方法。该方法利用表达Fusarium proliferatum内酯酶基因的重组大肠杆菌细胞在优化条件下发酵产酶，然后以一锅煮的方式选择性催化水解4-苯基-2-羟基-4-丁内酯的非对映异构体，再将所需的构型在常温常压Pd/C催化氢化作用下，生成目标化合物。其中(R)-2-羟基-4-苯基丁酸的对映体过量值达98％，摩尔转化率达36％，(S)-2-羟基-4-苯基丁酸的对映体过量值达99％以上，摩尔转化率达46％。本发明所述的生物催化剂及其化学-酶法工艺不仅具有较好的催化效果，而且操作简便、安全，成本低廉，产物容易纯化，对环境友好，具有工业开发应用前景。

主权项

一种利用内酯酶制备光学纯2‑羟基‑4‑苯基丁酸的方法，其特征是包括如下步骤：1)采用Fusarium proliferatum内酯水解酶水解4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯(1)将表达来自保藏号为CGMCC1494的Fusarium proliferatum内酯水解酶基因的重组大肠杆菌JM109(DE3)或BL21(DE3)，在发酵培养基中进行扩增培养，离心洗涤得到静息细胞；(2)将(1)收获的静息细胞悬浮于pH为6.0～7.0的磷酸钾缓冲液中，加入4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯，在25～40℃反应0.5～8h，然后采用常规的分离方法从反应混合物中收集光学纯的(2S)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯、(2R)‑4‑苯基‑2，4‑二羟基丁酸和(2R)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯；2)将步骤1)所获得的光学纯的(2S)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯、光学纯的(2R)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯或光学纯的(2R)‑4‑苯基‑2，4‑二羟基丁酸用冰醋酸溶解，在常温常压和Pd/C催化的条件下氢化12h，得到(S)2‑羟基‑4‑苯基丁酸、(R)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸或(R)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸；所述的光学纯的(2S)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯、光学纯的(2R)‑4‑苯基‑2‑羟基‑4‑丁内酯或光学纯的(2R)‑4‑苯基‑2，4‑二羟基丁酸与Pd/C的重量比为1∶0.01～0.05。