多重PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法

摘要

本发明涉及到一种多重PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，即是一种基于多重PCR的反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，包括了引物的设计、探针的设计、杂交试验、结果判定，能够同时检测结核分枝杆菌对RIF、INH和EMB三种药的耐药性，大大缩短了检测的时间，结果可靠。

主权项

一种多重PCR‑反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐药性的方法，其特征在于：A、多重PCR的反应在一个管中完成，且一次性PCR扩增至少四个待检测DNA片段；B、反向斑点杂交中所述的低密度探针阵列至少包括19条能够同时检测与RIF、EMB和INH耐药相关的rpoB，katG，inhA基因调节区和embB基因突变热点区的碱基突变以及对结核杆菌复合群进行菌种鉴别诊断的探针；C、所述的带有羧基而呈负电的杂交膜，与氨基标记的寡核苷酸探针共价结合，形成桥式结构；D、多重PCR中的引物采用链霉亲和素－碱性磷酸酶结合的生物素进行标记，通过催化底物BCIP/NBT反应形成有颜色的物质来判定杂交的阳性和阴性，反映PCR产物与探针有无突变。