一种从低温乙醇法组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种从低温乙醇法组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取回收白蛋白的方法。传统回收方法存在层析柱的处理量小、离心分离固液设备投资较大和能耗较高的缺点，在提取过程中对该组份只针对丙种球蛋白进行进行了提取，但在FⅡ上清中仍然含有较多的白蛋白，影响了提取效率。本发明采用的技术方案包括以下步骤（1）F1上清液的制备，（2）FⅢ上清液的制备，（3）粗白蛋白溶液的制备，（4）FⅢ沉淀白蛋白的提取，（5）Ⅴ沉淀的制备，（6）蛋白质溶液除杂，（7）制备白蛋白制品。本发明有效回收了残留在组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中的白蛋白，使每吨血浆原料白蛋白的提取量增加了0.5～1.0千克，提高了白蛋白的总收得率，降低了生产成本。

主权项

一种用低温乙醇法从组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中回收白蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）F1上清液的制备用5～6倍体积的注射用水溶解组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，在1～5℃下搅拌3～5小时令其完全溶解后，加入磷酸二氢钠至0.01mol/L，之后再用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至5.00±0.05，缓慢加入体积分数为95%的乙醇令溶液中乙醇体积浓度达到7.5～8.5%，并控制溶液温度在‑2.5～‑2℃之间，使其产生F1沉淀；待F1沉淀产生完全后加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，继续搅拌使液体呈浆状，压滤分离出体系中产生的FⅠ沉淀，得FⅠ上清液；（2）FⅢ上清液的制备将上步FⅠ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至5.15±0.05，继续添加乙醇至体积浓度13.5～14.5%，控制液体温度在‑4～‑3.5℃使其产生FⅢ沉淀；待FⅢ沉淀产生完全后加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土3.0±0.2g/L，继续搅拌使液体呈浆状；在2.0～2.8bar压力下过滤分离出体系中产生的FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；（3）粗白蛋白溶液的制备将FⅢ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6.9～7.0，加入氯化钠至浓度5.0±0.2g/L，缓慢添加乙醇至体积浓度17.5～18.5%，控制体系温度在‑5.0±0.1℃，产生FⅡ沉淀，向液体中添加珍珠岩至1.0±0.2g/L，经压滤分离出FⅡ沉淀，FⅡ上清滤过液经超滤浓缩至蛋白质浓度≥18%，得到粗白蛋白溶液；（4）FⅢ沉淀白蛋白的提取将第（2）步的FⅢ沉淀用800～1000升温度在5℃以下的注射用水溶解，搅拌令其完全溶解后加入氯化钠至8～9g/L和枸橼酸钠至2～3g/L；将该溶液与第（4）步的粗白蛋白溶液混合，继续添加氯化钠至7±0.5g/L，枸橼酸钠4±0.5g/L；用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH至5.25±0.05，缓慢添加体积分数为95%的乙醇至体积浓度20%，同时降温至‑4.5±0.5℃，压滤去除FⅢ沉淀，保留FⅢ上清滤液；（5）Ⅴ沉淀的制备用0.2 mol/L的氢氧化钠调节FⅢ上清至pH6.3±0.1，保持温度在‑4.5±0.5℃，缓慢添加乙醇至乙醇浓度38%；压滤后得FⅢ‑1上清滤液，调节pH至5.75±0.05，降温至‑5.5±0.5℃，并添加乙醇至浓度40%；再次压滤后得FⅢ‑2上清滤液，调节pH至4.80±0.05，继续降温至‑8.0±0.1℃，压滤后获得组份Ⅴ沉淀；（6）蛋白质溶液除杂将组份Ⅴ沉淀用6～7倍体积的注射用水溶解，调pH4.6±0.1，保持温度在‑3～‑2℃，缓慢添加乙醇至体积浓度12～14%，将溶液经深层过滤去除杂质；调节滤过液pH值至5.20±0.05，经离子交换层析去除溶液中的杂蛋白；流出液调节pH7.1±0.1，添加氯化钠至9±0.1g/L；得蛋白质溶液；（7）制备白蛋白制品将蛋白质溶液进行超滤至蛋白质浓度≥18%，获得白蛋白制品溶液，经病毒灭活和除菌分装后获得白蛋白制品。