农杆菌介导转化海岛棉的方法

摘要

本发明提供了农杆菌介导转化海岛棉的方法，包括以下步骤：1)受体培养；2)农杆菌的培养；3)受体与带有植物表达载体的农杆菌共培养；4)诱导抗性愈伤组织；5)分化抗性体细胞胚胎；6)体细胞胚胎分化抗性植株。本发明获得农杆菌介导转化海岛棉再生植株，以下胚轴直接做为转化受体，诱导出抗性愈伤组织以及抗性体细胞胚胎，并且体细胞成胚率达到30％、体细胞成苗率20％。提高了海岛棉的遗传转化效率提高了使现代生物技术可以大规模的用于海岛棉育种上，解决了农杆菌介导法在海岛棉上应用的关键问题，为海岛棉遗传改良提供技术理论。

主权项

农杆菌介导转化海岛棉的方法，包括以下步骤：1)受体培养：选用海岛棉无菌苗的下胚轴作为农杆菌转化受体，将培养7天的无菌苗下胚轴切段，切成0.5‑1cm大小；2)农杆菌的培养；3)受体与带有植物表达载体的农杆菌共培养：将切段的下胚轴浸泡在带有植物表达载体的农杆菌菌液中；4)诱导抗性愈伤组织：将菌液浸泡过的下胚轴置于共培养培养基上共培养，共培养培养基成分是MSB为基本培养基，附加0.5mg/LNAA和0.1mg/L KT;5)分化抗性体细胞胚胎：将下胚轴受体接种于诱导抗性愈伤组织培养基上诱导分化，诱导培养基是MSB为基本培养基，附加0.5mg/LNAA、0.1mg/L KT以及相应的选择性抗生素;6)体细胞胚胎分化抗性植株：将抗性愈伤组织接种于分化培养基上使其分化出抗性体细胞胚胎，愈伤组织分化培养基是MSB为基本培养基氮素加倍附加选择性抗生素；挑出抗性体细胞胚胎诱导其分化成苗，细胞胚胎分化培养基是MSB为基本培养基附加0.5mg/L谷氨酰氨和0.5mg/L天门冬酰氨。