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沼湿草的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗1‑3h，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为70‑75％的乙醇浸泡10‑50s，体积浓度为0.5‑2‰的汞浸泡10‑30min，再用无菌水冲洗4‑6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0.5‑2cm的带腋芽的节段，节段接种于腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于腋芽诱导培养基上1‑3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3‑4周后节段上看见芽分生组织，再培养1‑2个月，芽长到3‑4cm长，将不定芽切下移入不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组织较多，但不定芽仍增殖较快，生长发育良好，并无玻璃化不良现象；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后将分成小丛的不定芽转至壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20‑30天后长到3‑4cm；(4)生根培养取3‑4cm的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，8‑15天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25‑35天后长至4‑6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90‑100％；(5)炼苗与移栽在生根培养15‑25天，根系长至0.5‑2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗1‑3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化25‑40天，即移栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为90‑100％；所述的腋芽诱导培养基包括MS+6‑BA1.0‑3.0mg/L+NAA0.05‑0.2mg/L；所述的不定芽增殖培养基包括MS+6‑BA0.5‑2.0mg/L+NAA0.05‑0.2mg/L；所述的壮苗培养基包括MS+6‑BA0.05‑2.0mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L；所述的生根培养基包括MS+NAA0.1‑0.3mg/L。 |
