一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化磷脂酶的方法

摘要

本发明提供一种以醋酸纤维素和聚四氟乙烯膜为材料制备了醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜，采用物理吸附固定化方法，用该复合膜来固定化磷脂酶。研究了酶液浓度、吸附时间、温度和搅拌速度等不同固定化条件对脂肪酶固定化效率和催化效果的影响，并采用响应面的分析方法。通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化磷脂酶的优势。根据本发明中复合膜的吸附特性固定化磷脂酶，提高了酶在反应体系中的活性和稳定性，调节和控制酶的活性与选择性，从而有利于酶的回收和产品的生产，最终得到的固定化酶活为4U/cm2，明显高于文献中单膜法固定化磷脂酶的活力。

主权项

一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化磷脂酶的方法，其特征在于用复合膜来固定化磷脂酶的方法通过以下步骤实现：一、复合膜的制备：将15g醋酸纤维素60℃下溶于85g二甲基甲酰胺中得到铸膜液。将聚四氟乙烯膜先用0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液清洗，然后用去离子水清洗，真空干燥后，平铺在洁净的玻璃板上。控制厚度，将醋酸纤维素铸膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，在室温下挥发适当的时间完成干相转换后，浸入去离子水完成湿相转换。12h后用去离子水清洗，自然干燥待用；二、磷脂酶的固定化：取若干份1cm2的醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜于三角瓶中，分别加入一定量的酶液和pH＝5.0的磷酸氢二钠/柠檬酸缓冲液，搅拌吸附一定时间。反应结束后取出酶膜，用去离子水冲洗，放于干燥处待其风干后测定酶活。三、酶活力的测定。四、固定化条件的优化：分别在酶液浓度0.02g/mL～0.07g/mL，吸附时间1h～6h，温度45～70℃，搅拌速度80r/min～280r/min的条件下，通过测定固定化酶活力得到最佳的固定化条件。五、采用响应面法进行分析讨论最终确定最佳固定化条件。六、通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化磷脂酶的优势。