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地锦球的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)无菌材料的获得取大球茎上的小球茎，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗1‑3h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为70‑75％的乙醇浸泡10‑50s，体积浓度为0.5‑2‰的汞浸泡10‑30min，再用无菌水冲洗4‑6次，利用无菌滤纸吸干表面的水分后，将小球茎接种于小球茎诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖小球茎接种于小球茎诱导培养基上2‑4周后，小球茎部位开始膨大，出现绿色突起，4‑6周后见芽分生组织，再培养1‑2个月，小球茎长到1‑2cm，将小球茎切下转入小球茎增殖培养基中进行增殖培养，小球茎基部的愈伤组织较多，小芽也较多，但不影响增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化不良现象，在培养基中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在小球茎增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2‑3株能够伸长，其余的处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，20‑40天后小球茎长到0.2‑0.5cm；(4)生根培养取0.2‑0.5cm的小球茎，转接入生根培养基中诱导生根，15‑30天后幼苗基部分化出白色的根原基，25‑40天后长至2‑3cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90‑100％；(5)炼苗与移栽生根培养20‑40天，根系长至0.5‑1.5cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗2‑4天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化20‑40天，即移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90‑100％；所述的小球茎诱导培养基包括MS+6‑BA1.0‑5.0mg/L+NAA0.1‑0.5mg/L；所述的小球茎增殖培养基包括MS+6‑BA1.0‑3.0mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L；所述的壮苗培养基包括MS+6‑BA0.5‑2.0mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L；所述的生根培养基包括MS+NAA0.1‑0.3mg/L。 |
