凝结芽孢杆菌的荧光定量PCR快速检测方法

摘要

一种快速检测凝结芽孢杆菌的荧光定量PCR方法。首先提取待测样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用凝结芽孢杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物；然后使用该引物对待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和检测。其加样参数为：每个荧光定量PCR反应总体积为25μl，包括提取的基因组DNA，2μl；10×PCR??Buffer，2.5μl；Mg2+1.5mmol/L；Tag酶1u；UNG酶1u；dNTP??0.1mmol/L????凝结芽孢杆菌特异性引物、探针各10pmol；最后加ddH2O至25μl；设置荧光定量PCR仪的程序参数为：37℃2min；95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火40s，同时收集FAM荧光，40个循环；4℃保存。具有检测速度快、灵敏度高、成本低的优点。

主权项

一种快速检测凝结芽孢杆菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取待测样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用凝结芽孢杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物和探针；然后使用该引物和探针对待测样品分离琼脂平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和检测，其中所述的凝结芽孢杆菌特异性引物为：B.coagF 1：5’ CGAACTCGAAGAATATGATGACA 3’；B.coagF 2：5’ TCATCTTTCGACATGATTTGG 3’。特异性探针为：B.coagF 3：5’ FAM TCACAAGCTCTTGATAAGCATTCCGG 3’。