发明名称 |
一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法 |
摘要 |
本发明涉及生物制药技术领域,特别涉及一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法,包括有制备初步纯化的rTPA38KDa包涵体蛋白,rTPA38KDa包涵体蛋白的裂解,第一次阴离子交换层析方法进行复性和纯化,第二次阴离子交换层析方法进一步纯化,超滤后获得rTPA38KDa包涵体蛋白原液。本发明采用“先复性后纯化”的方法,通过两次阴离子交换层析完成目的蛋白的复性和纯化,目的蛋白总得率达到30%以上,纯度达到95%以上,与现有技术相比,本发明采用的方法可工业放大,便于质量控制,其工艺步骤少、生产成本更低、效率更高。 |
申请公布号 |
CN102295687A |
申请公布日期 |
2011.12.28 |
申请号 |
CN201110233072.7 |
申请日期 |
2011.08.12 |
申请人 |
广东瀚森生物药业有限公司 |
发明人 |
李黄金;温桂萍;陈伟锋;李申建 |
分类号 |
C07K14/35(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/35(2006.01)I |
代理机构 |
东莞市华南专利商标事务所有限公司 44215 |
代理人 |
刘克宽 |
主权项 |
一种结核分枝杆菌重组包涵体蛋白的复性与纯化方法,其特征在于:所述方法包括有以下步骤:步骤a.制备初步纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白将发酵培养的初始工程菌经破碎、收集沉淀、洗涤、离心后获得初步纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白;步骤b.rTPA38KDa 包涵体蛋白的裂解将步骤a获得的rTPA38KDa 包涵体蛋白采用变性剂溶液溶解,过滤后获得含有裂解的rTPA38KDa 包涵体蛋白的变性液;步骤c.第一次阴离子交换层析方法进行复性和纯化将步骤b获得的变性液采用含有DEAE‑Sepharose FF层析介质的阴离子交换层析方法进行复性和纯化,收集洗脱峰,获得含有已复性和中度纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白的第一缓冲液;步骤d.第二次阴离子交换层析方法进一步纯化将步骤c获得的第一缓冲液采用含PEI‑WP 硅胶层析介质的阴离子交换层析方法进一步纯化,收集洗脱峰,获得含有高度纯化的rTPA38KDa 包涵体蛋白的第二缓冲液;步骤e:将步骤d获得的第二缓冲液进行超滤或透析获得rTPA38KDa 包涵体蛋白原液。 |
地址 |
523808 广东省东莞市松山湖科技产业园区科技九路6号广东瀚森生物药业有限公司 |