受激发子Nep1诱导的过敏性细胞死亡的调控基因的克隆方法

摘要

采用病毒诱导基因沉默技术从以PVX病毒载体建立的本氏烟(Nicotiana benthamiana)cDNA文库中筛选受激发子Nep1诱导的过敏性细胞死亡的调控基因的方法，其中以农杆菌Gv3101为宿主、利用PVX病毒表达载体构建单克隆的本氏烟cDNA文库，采用牙签刺伤法或注射接种法接种本氏烟，从上述单克隆文库中筛选能使激发子诱发的过敏性细胞死亡表型发生改变的阳性克隆，然后对上述阳性克隆进行序列测定和分析。

主权项

一种受激发子Nep1诱导的过敏性细胞死亡的调控基因的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以农杆菌为宿主，利用病毒表达载体构建单克隆的本氏烟cDNA文库；(2)将上述单克隆的本氏烟cDNA文库的培养菌液注射接种本氏烟的叶片；(3)然后将激发子Nep1注射处理上述基因沉默的烟草；(4)筛选基因沉默后激发子诱导的过敏性细胞死亡表型发生改变的克隆。