高效复合微生物豆粕发酵剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种高效复合微生物豆粕发酵剂的制备方法，属于生物酶解发酵技术领域，其制备方法包括分别将嗜酸性乳杆菌、乳酸乳杆菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母、枯草芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌进行优化筛选、摇瓶混合培养、10L发酵罐培养、制作微生物复合保护剂、低温喷雾干燥、配制豆粕发酵剂等步骤，本发明能有效地抑制杂菌生长，消除或显著降低了豆粕中的抗营养因子、胀气因子，提高了蛋白利用率，增强了免疫力，具有耐酸、耐盐、耐温及耐胆汁的优良特性，其制备方法简单，成本低廉，生产的产品质量稳定可靠，适用范围广。

主权项

一种高效复合微生物豆粕发酵剂的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：1) 菌种优化筛选：分别将嗜酸性乳杆菌、乳酸乳杆菌、酿酒酵母、产朊假丝酵母、枯草芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌进行菌株耐酸、耐胆汁盐、耐高铜和耐温驯化；①菌株的耐酸驯化：pH3.0‑3.5，筛选出耐酸菌株；②耐胆酸驯化：在培养基中加入不同浓度的胆酸盐，对菌株进行驯化；③耐高铜选育：在含200‑250mg/kg铜的MRS肉汤培养基中生长；④耐温驯化：将活化后的菌体培养物接种至LB、TB液体培养基中，培养一定时间后在40‑60℃水浴中加热一定时间，随后继续将培养物置于37℃培养；2) 摇瓶混合培养：菌株培养采用主要有葡萄糖或玉米淀粉、鱼粉或酵母粉、无机盐组成的培养基，在摇瓶中进行；①嗜酸性乳杆菌培养：MTB培养基的组成为葡萄糖80‑90g/L、蔗糖8‑10g/L、蛋白胨3‑5g/L、酵母粉2‑25g/L、柠檬酸钠10‑12g/L、KH2PO42.2‑2.4g/L、K2HPO410‑12g/L，在26‑37℃下进行深层液体发酵；②乳酸乳杆菌培养：GTB培养基的组成为葡萄糖60‑70g/L、牛肉膏8‑10g/L、酵母粉10‑15g/L、MgSO41.2‑1.6g/L、NaCl 2.2‑2.5g/L、KH2PO42.2‑2.4g/L、K2HPO410‑12g/L，起始pH值为6‑6.5，培养温度为26‑35℃，接种量为3％；③乳酸杆菌的混合培养：将培养后的嗜酸性乳杆菌和乳酸乳杆菌放入MTB培养基中混合培养，通过调节发酵中菌种的配比，采用两段培养温度35、37℃，培养时间18‑24小时；④酿酒酵母培养：培养基组成为酪蛋白胨12‑15g/L、酵母粉12‑15g/L、葡萄糖25‑30g/L、KH2PO42.2‑2.4g/L、K2HPO4·3H2O 15‑16.34g/L，培养温度为26‑30℃； ⑤产朊假丝酵母培养：培养基组成为葡萄糖20‑25g/L、酵母粉10‑12g/L、(NH4)2HPO4 2.5‑3g/L、KH2PO4 2.2‑2.4g/L、K2HPO4·3H2O 15‑16.34g/L；⑥枯草芽胞杆菌培养：培养基组成为豆粕10‑12g/L、玉米粉18‑21g/L、鱼粉7‑7.3g/L、MgSO4 18‑2.1g/L，pH为5.5‑6.1，温度为26‑35℃；⑦地衣芽胞杆菌培养：培养基组成为豆粕8‑10g/L、玉米粉20‑25g/L、鱼粉6.5‑7.0g/L、MgSO4 2.2‑2.5g/L，pH为4.6‑5.1，温度26‑33.5℃；3) 10L发酵罐培养：将摇瓶培养的结果分别放入10L发酵罐中放大培养；4) 制作微生物复合保护剂：保护剂由脱脂乳粉、半胱氨酸、谷氨酸钠组成，其浓度为脱脂乳粉80‑85g/L、半胱氨酸0.04‑0.05mol/L、谷氨酸钠25‑30g/L，将保护剂加入嗜酸性乳杆菌和乳酸乳杆菌中，在真空冷冻干燥后，将其在4℃下进行贮藏；5) 低温喷雾干燥：低温喷雾干燥温度为20‑38℃；6) 配制豆粕发酵剂：将嗜酸性乳杆菌3.0‑4.0亿CFU/g、乳酸乳杆菌2.0‑3.0亿CFU/g、枯草芽孢杆菌10.0‑12.0亿CFU/g、地衣芽孢杆菌5.0‑6.0亿CFU/g、酿酒酵母3.0‑3.5亿CFU/g、产朊假丝酵母2.0‑3.0亿CFU/g混合均匀即可；高效豆粕发酵剂总菌数≥25亿CFU/g；