一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法

摘要

本发明公开了一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法，属于生物细胞活性检测技术领域。本发明首先将待测细胞染色并固定，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，利用毛细管区带电泳(CZE)对细胞进行单波长、或多波长紫外可见吸收检测，以检测的峰面积总和表示细胞在检测波长下的吸光值，以紫外和可见双波长吸收值的乘积表征细胞活性。本发明所述方法准确、快速、简便、成本低且能定性定量地检测细胞活性，可用于细胞活性检测以及毒物的细胞毒性分析，在细胞生物学、细胞毒理学及药物研发，毒物的毒性评价等相关领域均可应用。

主权项

一种基于毛细管区带电泳方式的细胞活性检测方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、对待测细胞样品进行预处理用细胞染料将待测细胞染色，离心后移去上清液，再加入磷酸盐缓冲液清洗细胞，直至将残留细胞染料洗净为止；之后，向清洗后的细胞沉淀中加入细胞固定液，由此对细胞进行固定化处理，细胞固定液和固定时间根据细胞染料特点和细胞性质进行选择；最后，用磷酸盐缓冲液清洗细胞，直至除去剩余的细胞固定液；其中，所述细胞染料为各种活细胞染料；所述细胞固定液为常用细胞固定液中的任意一种；步骤二、进行细胞悬浮液的配制向步骤一得到的细胞沉淀中加入电泳缓冲液，混匀后得到细胞悬浮液；然后，用细胞计数板计数确定出细胞浓度，再用电泳缓冲液调节细胞浓度至104‑107个/ml范围；其中，所述电泳缓冲液选用常用毛细管电泳缓冲液中的任意一种；步骤三、采用毛细管电泳仪进行毛细管区带电泳检测细胞将步骤二中配制好的细胞悬浮液转移至毛细管电泳进样瓶中，采用压力进样或电进样，使细胞悬浮液进入毛细管一端；然后加电压，使细胞悬浮液在毛细管内移动并通过二极管阵列检测器；此时，在选定的紫外波长和可见波长下同时检测进样细胞，将所有电泳峰的峰面积相加，得到峰面积总和，由其表示细胞在相应波长下的吸光值，用紫外和可见两波长的吸光值的乘积即可表示细胞活性的量值；其中，所述毛细管区带电泳所用毛细管的长度为30‑60cm，内径为10‑100μm；采用压力进样时的压强为5‑250mbar，进样时间为3‑30s；采用电进样方式时，电压为500V‑30KV，进样时间为3‑30s；加电压时的电泳电压为5‑30KV；检测时采用的紫外波长范围为180‑300nm，可见波长直接采用细胞染料的最大吸收波长值。