同时提高蛋白质结晶成功率及晶体质量的方法

摘要

本发明涉及一种同时提高蛋白质结晶成功率及晶体质量的方法，用于解决现有的蛋白质结晶方法难以同时提高结晶成功率和晶体质量的技术问题。技术方案是利用对蛋白质具有吸附-解吸附功能的吸附材料，在结晶溶液中同时形成两个浓度区域，在吸附材料附近的高浓度区，及远离吸附材料的低浓度区。从而同时达到高浓度条件促使蛋白形核，低浓度条件促使蛋白晶体生长。将吸附材料置于溶液内的上方位置，晶体在上方形核，起到提高结晶成功率的作用。而当晶体长大到数微米尺度时，因重力作用，沉降到溶液内下方位置，该位置溶液浓度低，在提高蛋白质结晶质量的同时，蛋白质结晶的成功率也由背景技术的-30％-67％提高40％-80％。

主权项

一种同时提高蛋白质结晶成功率及晶体质量的方法，其特征在于包括下述步骤：(a)将浓度为10‑80mg/mL、体积为2‑20μL或者1‑6颗吸附‑解吸附材料添加到蛋白质结晶容器中拟结晶位置；对于密度大于蛋白质溶液的吸附‑解吸附材料的添加方法是在结晶孔板中拟结晶位置涂抹真空脂，用小镊子将吸附‑解吸附材料粘附在涂有真空酯的结晶孔板中拟结晶位置上；对于密度小于蛋白质溶液的‑解吸附吸附材料的添加方法是将吸附‑解吸附材料直接添加到结晶孔板中拟结晶位置；或者将吸附‑解吸附材料用酒精分散成溶液，用移液器添加至结晶孔板中拟结晶位置；(b)将拟结晶的蛋白质加入到缓冲液中，溶解，制成浓度＞0mg/mL，并且蛋白质溶液的初始浓度是6‑50mg/mL；(c)将蛋白质结晶试剂与蛋白质溶液按照体积比为1∶0.1‑4混合，配制出蛋白质结晶溶液；(d)将蛋白质结晶溶液添加到蛋白质结晶容器中拟结晶位置，与蛋白质结晶容器中吸附‑解吸附材料混合；(e)将蛋白质结晶溶液与蛋白质结晶试剂置于同一密封空间但不互相接触，形成一个稳定的气相扩散体系，在恒温4‑22℃温度范围内静置4‑30天，实现结晶。