利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法

摘要

本发明涉及利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种培养基后加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导，然后离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Proinity eXect纯化柱对目的蛋白进行纯化，即获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。与现有技术相比，本发明具有可溶性表达水平高、纯化工艺简单、产品纯度高、易扩大生产和成本低的特点，具有较大的工业化应用前景。

主权项

利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中，在37℃、200rpm/min的条件下振荡培养过夜，然后再将其接种于优化过的LB培养基中在相同条件下继续培养，当OD600＝0.6‑0.8时，加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导，在37℃、200rpm/min的条件下继续培养6h；(2)离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Proinity eXect纯化柱对目的蛋白进行纯化，使用Band Buffer冲洗Proinity eXect纯化柱，再将上清液按2ml/min的速度上柱，接着使用Wash Buffer冲洗柱上杂蛋白，加入EloutionBuffrt孵育1h，最后收集穿透液，即获得纯化的肿瘤转移抑制蛋白GDI2。