发明名称 CONVERSION ENZIMATICA DE GLOBULOS ROJOS DE LOS GRUPOS SANGUINEOS A, B Y AB UTILIZANDO A-N-ACETILGALACTOSAMINIDASAS Y A-GALACTOSIDASAS CON ESPECIFICIDADES DE SUSTRATO Y PROPIEDADES CINETICAS UNICAS.
摘要 Una α-galactosidasa para eliminar antígenos tipo B de las células reactivas de los grupos sanguíneos B o AB en los hemoderivados, donde dicha α-galactosidasa tiene las características siguientes: (i) no tiene actividad detectable con un antígeno P1, (ii) es activa para escindir uniones α1,3-D-galactosa en un antígeno ramificado tipo B a pH 6-8, y (iii) se puede aislar por un método que comprende los pasos de: (1) proporcionar un cultivo de fermentación de una cepa de Streptomyces griseoplanus Nº 2357, que produce una α-galactosidasa, depositada como ATCC Nº de depósito PTA-4077; (2) desestabilizar la cepa de Streptomyces griseoplanus cultivada del paso (1) mediante el método de prensa francesa; (3) aislar una fracción de sobrenadante que contenga la α-galactosidasa de la cepa desestabilizada de Streptomyces griseoplanus, del paso (2) mediante centrifugación a 10 000 x g; (4) fraccionar la fracción de sobrenadante que contiene la α-galactosidasa del paso (3) con sulfato de amonio para producir una fracción de 20 a 60 por ciento de sulfato de amonio enriquecida en la α-galactosidasa; (5) disolver el precipitado de la α-galactosidasa de la fracción de 20 a 60 por ciento de sulfato de amonio del paso (4) en Tris 20 mM (pH 7.5) y clarificar mediante centrifugación, (6) fraccionar secuencialmente mediante cromatografía en Q-sefarosa (tampón Tris 20 mM, pH 7.5 con un gradiente de NaCl 0-1.5 M), S-sefarosa (tampón de NaOAc 20 mM, pH 5.3 con un gradiente de Na Cl 0-1.0 M) y mediante cromatografía de filtración en gel S12 (tampón de NaOAc 20 mM, pH 5.3, con NaCl 0.5 M o NaPO4 20 mM, pH 6.5, con NaCl 0-5 M) para producir una α-galactosidasa purificada, que eluya con un peso molecular de 40-80 kilodalton.
申请公布号 ES2370481(T3) 申请公布日期 2011.12.16
申请号 ES20020763720T 申请日期 2002.09.25
申请人 VELICO MEDICAL, INC. 发明人 CLAUSEN, HENRIK;DE LA VEGA, HUMBERTO;HILL, CHERYL;LIU, QIYONG
分类号 C12N9/40 主分类号 C12N9/40
代理机构 代理人
主权项
地址