用BAC-retrieve的方法同时构建条件基因打靶载体和传统打靶载体

摘要

本发明公开了一种用噬菌体的大肠杆菌同源重组系统(BAC-retrieve)的方法同时构建含有Cre-LoxP的条件敲除载体(conditional??targeting??vector)和传统打靶载体(convetional??targeting??vector)，用来同时制作条件基因敲除小鼠和传统敲除小鼠。该方法摆脱了传统意义上的打靶载体的构建受基因组DNA上限制性内切酶位点的局限性，更有利于筛选用于后期Southern杂交进行阳性克隆筛选时的内切酶的选取，更好区分重组和野生型染色体，而且更有利于我们对打靶区域的选择，具有高效、省时、灵活的三大特点。

主权项

一种两用型基因打靶载体的构建方法，其特征在于，该方法选用BAC retrieve的方法构建条件型打靶载体，所构建的载体含有正选基因(neo)和负选基因(tk)，其中，正选基因的两端各有FRT序列，LoxP序列分别插入到被去掉的目的序列的两端，该载体在体外表达重组酶Cre的情况下，可以诱导产生传统型打靶载体，所产生的传统型打靶载体含有正选基因(neo)和负选基因(tk)，其中，正选基因的两端各有FRT序列，负选基因(tk)位于3’同源臂外侧。