一种利用PolyHEMA检测细胞变形能力的方法

摘要

本发明公开了一种利用PolyHEMA检测细胞变形能力的方法，是通过polyHEMA对细胞与其基质连接处进行部分隔离，对细胞变形能力进行评估检测，通过显微镜记录细胞变形，生长的过程，利用CCK8检测等方法对细胞的变形能力进行量化分级，实现对细胞的变形能力强弱的判定，本发明方法具有相对经济，简便，快捷，易于操作等特点。

主权项

一种利用PolyHEMA检测细胞变形能力的方法，步骤是：(1)以减量法或划痕法制备鉴定用PolyHEMA包被板；其中，所述减量法制备polyHEMA包被板的方法是：在细胞培养板内加入浓度为12mg/ml的polyHEMA乙醇溶液，使板每孔中polyHEMA终密度为0.5mg/cm2～2.5mg/cm2，然后室温下晾干含polyHEMA液的细胞培养板，得到板底呈网络形状的狭隙的减量polyHEMA板；所述划痕法制备polyHEMA包被板的方法是：在细胞培养板内加入浓度为12mg/ml的polyHEMA乙醇溶液，使板每孔中polyHEMA终密度为2.5mg/cm2～8.5mg/cm2，然后室温下晾干含polyHEMA液的细胞培养板，再用一次性注射器针头或手术刀片倾斜15‑45度角，在已经制备好的polyHEMA膜的中央划痕，使划痕宽度为10μm～20μm，得到板底有人工划痕通道的划痕polyHEMA板；(2)将浓度为1×106个细胞/ml～5×106个细胞/ml的对数生长期的细胞悬液接种至上述灭菌后的polyHEMA板中，待细胞匀均铺满polyHEMA板后，置37℃，CO2培养箱中培养12～60h；期间显微镜下观察细胞在polyHEMA膜与细胞培养板间形成的狭隙中穿越和生长的情况，不能自由穿越polyHEMA狭隙，细胞体积变小，聚集成团，细胞增殖受到阻滞的细胞判定为变形能力弱的细胞；能穿越polyHEMA狭隙，细胞伸展，变为不规则形，细胞贴壁，开始增殖的细胞判定为变形能力强的细胞；细胞变形能力越强，表现为穿越polyHEMA狭隙的细胞越多，贴壁生长的细胞越多；(3)将浓度为1×106个细胞/ml～5×106个细胞/ml的对数生长期的细胞悬液按100μL细胞悬液/孔接种至灭菌后的96孔减量或划痕polyHEMA板中，混匀后置37℃，CO2培养箱中培养12～48h，期间每隔12h取每组3个复孔加入10μL CCK8，混匀后置37℃，CO2培养箱中继续培养90min；用酶标仪在450nm处读取并记录数据，依据数据绘制生长曲线；生长曲线中CCK8检测OD450nm值低于刚接种polyHEMA板时OD450nm基础值120％的，视为所对应细胞为变形能力弱的细胞；生长曲线中CCK8检测OD450nm值升高超过刚接种polyHEMA板时OD450nm基础值120％的，视为所对应细胞为变形能力强的细胞。