利用逆向基因工程技术开发蛋白质疫苗与禽流感疫苗的方法

摘要

本发明是有关于一种蛋白质疫苗的制备方法，包括：(a)取得一标的抗原蛋白质至少一抗原决定位胜肽的胺基酸序列；(b)将抗原决定位胜肽的野生型核酸序列，进行改质；(c)合成此合成型核酸序列的复数个引子；(d)于体外合成此合成型核酸；(e)将此合成型核酸结合成一合成质体；(f)将此合成质体转形入宿主细胞，以生产合成型核酸所编码的抗原决定位胜肽；以及(g)收集并纯化抗原决定位胜肽。对于高致病性高危害性的疾病，由本发明的逆向基因工程平台技术，可快速的发展出具有抗体诱发效果的高安全性疫苗。

主权项

一种制备一禽流感病毒融合抗原蛋白的方法，包括：(a)选取一禽流感病毒蛋白的抗原决定位胜肽的氨基酸序列，对应转码出该禽流感病毒蛋白的抗原决定位胜肽的野生型核酸序列；(b)将该抗原决定位胜肽的野生型核酸序列，改质为于一宿主细胞中可辨识，编码有该抗原决定位胜肽的一合成型核酸序列；(c)合成复数个引物，其中正向引物的核酸序列如SEQ ID NOs：89‑92所示，反向引物的核酸序列如SEQ ID NOs：93‑96所示；(d)利用上述引物于体外合成该合成型核酸；(e)将合成的核酸序列结合一带有结合与移位功能的核酸序列，并与一羧基终端核酸序列的载体形成一融合型基因质粒，其中该羧基终端核酸序列部分编码出一羧基终端胜肽，该羧基终端胜肽包括KDEL的氨基酸序列；以及(f)于一宿主细胞中表现该融合型基因质粒，以生产该禽流感病毒融合抗原蛋白，其包括：(i)具有结合与移位功能的胜肽；(ii)禽流感病毒蛋白的抗原决定位胜肽；以及(iii)羧基终端胜肽，其包括KDEL的氨基酸序列；其中，该结合与移位功能的核酸序列来自假单胞菌属外毒素；该禽流感病毒蛋白的抗原决定位胜肽氨基酸序列是SEQ ID NO：7。