基于靶蛋白亲和选择的活性成分高通量筛选方法

摘要

本发明涉及医药领域，具体涉及高通量筛选领域，涉及一种基于靶蛋白亲和选择的活性成分或活性成分群的高通量筛选方法，本发明通过将靶蛋白与待测化合物在缓冲液中孵育，孵育得到的混合溶液上样于分子排阻色谱柱或在线固相提取柱，缓冲液洗脱，洗脱液经解离，解离液再经在线固相提取柱分离，最后导入高效液相—质谱系统进行分析，进行化合物结构确证，并对其进行定量分析，计算这些活性成分对于靶蛋白的结合率，以评价其活性。本发明的筛选方法大大提高了从化合物群中筛选活性成分(群)的效率，是一种操作相对简单，成本较低的高通量药物筛选方法。

主权项

一种基于靶蛋白亲和选择的活性成分高通量筛选方法，包括：筛选活性化合物，将筛选到的活性化合物导入高效液相‑质谱系统进行分析，进行化合物结构确证，并对其进行定量分析，计算这些活性成分对于靶蛋白的结合率，评价其活性，其特征是筛选活性化合物包括如下步骤：a、将靶蛋白与待测化合物在缓冲液中共孵育，孵育溶液上样于分子排阻色谱柱或在线固相提取柱，用缓冲液洗脱柱子，洗脱液流经紫外检测器，在吸收波长280nm下检测并收集首先出峰的洗脱液；b、将洗脱液与解离液混合进行解离，解离溶液上样于在线固相提取柱，靶蛋白和缓冲盐流出柱子，而活性成分保留在在线固相提取柱上；c、洗脱b步骤得到的保留活性成分的在线固相提取柱，洗脱液进入高效液相‑质谱系统进行分析；其中缓冲液选自pH6.0～8.0的磷酸盐缓冲液、pH6.0～8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、pH6.0～8.0乙酸铵缓冲液或pH6.0～8.0碳酸氢铵缓冲液；孵育缓冲液中还含有增溶剂，所述增溶剂选自吐温、二甲基亚砜、聚乙二醇、曲拉通、甲醇、乙醇中的一种或几种。