基于量子点技术的一种非洲猪瘟检测方法

摘要

一种纳米材料领域的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，包括如下步骤：(1)首先将量子点分散在硼酸盐缓冲溶液中，然后加入硫化二亚胺和二抗，混合，反应，离心，洗涤，得到量子点标记的非洲猪瘟单克隆抗体复合物；其中，量子点∶硫化二亚胺∶二抗摩尔比为60∶15∶1；或者(2)首先将量子点分散在含有体积分数为1.25％的戊二醛的磷酸缓冲溶液中，分散，反应，加入二抗，反应，离心，洗涤，得到量子点标记的非洲猪瘟单克隆抗体复合物；其中，量子点∶戊二醛∶二抗摩尔比为60∶15∶1；之后按照标准免疫组化检测方法进行免疫反应和观察。本发明的方法用荧光显微镜直接进行观察，简单易行，荧光光稳定性增加，分析的准确度和检测的灵敏度有所提高。

主权项

基于量子点技术的一种非洲猪瘟检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，将表面带有羧基或氨基的水溶性量子点与非洲猪瘟单克隆抗体连接，(1)如果是表面带有羧基的水溶性量子点，则首先将量子点分散在硼酸盐缓冲溶液中，然后加入硫化二亚胺和二抗，混合，25℃下反应3小时，离心，洗涤，得到量子点标记的抗体复合物；其中，量子点∶硫化二亚胺∶二抗的摩尔比为60∶15∶1；(2)如果是表面带有氨基的水溶性量子点，则首先将量子点分散在含有体积分数为1.25％的戊二醛的磷酸缓冲溶液中，超声使之完全分散，25℃下摇床活化反应3小时，加入抗体，在4℃下反应24小时，离心，洗涤，得到量子点标记的抗体复合物；其中，量子点∶戊二醛∶二抗的摩尔比为60∶15∶1；步骤二，将切片标本先放入二甲苯中脱蜡2次，然后置入无水乙醇中梯度水化，水洗，过氧化氢灭活内源性过氧化氢酶，微波抗原修复，水洗后用BSA封闭，4℃反应过夜，磷酸缓冲溶液先后加入量子点标记的抗体复合物，避光条件下37℃反应30‑60分钟，磷酸缓冲溶液漂洗，甘油封片；磷酸缓冲溶液替代一抗作为阴性对照，在荧光显微镜下观察样本。