感染性丙型肝炎病毒颗粒高效生产体系

摘要

本发明涉及生产感染性丙型肝炎病毒(HCV)颗粒的方法，该方法包含将含有以下DNA片段的表达载体导入到可接受HCV增殖的细胞中的步骤，其中所述DNA片段在RNA聚合酶I启动子的下游含有编码HCV的5’非翻译区和结构蛋白以及任意非结构蛋白的DNA序列、以及编码来自HCV JFH1株的非结构蛋白和3’非翻译区的DNA序列，并且在其下游含有RNA聚合酶I终止子。

主权项

生产感染性丙型肝炎病毒(HCV)颗粒的方法，该方法包含将表达载体导入由Huh7、Huh7.5.1、HepG2中选择的细胞中的步骤：其中i)将下述表达载体引入到Huh 7.5.1细胞，该表达载体包含：pHH21载体中的人RNA聚合酶I启动子下游的、SEQ ID NO：29的DNA序列，以及在SEQ ID NQ：29的DNA序列下游的、包含小鼠RNA聚合酶I终止子的DNA，其中SEQ ID NO：29的DNA序列包含来自HCV JFH1和J6CF株的嵌合5’非翻译区，编码来自HCV J6CF株的核心蛋白、E1蛋白、E2蛋白、p7蛋白的DNA序列，和编码来自HCV JFH1株的NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白的DNA序列以及3’非翻译区；ii)将下述表达载体引入到Huh 7.5.1细胞，该表达载体包含：在pHH21载体中人RNA聚合酶I启动子下游的、SEQ ID NO：31的DNA序列，以及在SEQ ID NO：31的DNA序列下游的、包含小鼠RNA聚合酶I终止子的DNA，其中SEQ ID NO：31的DNA序列包含来自HCV JFH1和J1株的嵌合5’非翻译区，编码来自HCV J1株的核心蛋白、E1蛋白、E2蛋白、p7蛋白的DNA序列，和编码来自HCV JFH1株的NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白的DNA序列以及3’非翻译区；或iii)将下述表达载体引入到HepG2或Huh 7细胞，该表达载体包含：在pHH21载体中人RNA聚合酶I启动子下游的、SEQ ID NO：27的DNA序列，以及在SEQ ID NO：27的DNA序列下游的、包含小鼠RNA聚合酶I终止子的DNA，其中SEQ ID NO：27的DNA序列包含来自HCV JFH1株的嵌合5’非翻译区，编码核心蛋白、E1蛋白、E2蛋白、p7蛋白、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白的DNA序列以及3’非翻译区。