齐考诺肽的固相合成方法

摘要

本发明涉及一种齐考诺肽的固相合成方法，所述方法包括如下顺序步骤：以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为固相载体，进行程序反应，依次进行缩合反应连接25个保护基氨基酸，得到25个氨基酸的线性肽全保护树脂；其中，形成二硫键的三组Cys中，同组的Cys同时连接Trt、Acm或Mob保护基中的一种，且不同组的Cys所连接保护基各不相同；依次脱除3组Cys的保护基、并进行环化反应形成二硫环键，脱除侧链保护基团并切割树脂，得到含有3个二硫环的齐考诺肽。本发明的有益效果主要体现在：副产物少，定向效率高、方法简便，有利于产品纯化，产物收率高。

主权项

一种齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：(1).以Fmoc‑Rink Amide‑MBHA树脂为固相载体，进行程序反应，依次进行缩合反应连接以下氨基酸：Fmoc‑Cys(Mob)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Gly‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑OH，Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH，Fmoc‑Cys(Trt)‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑OH，Fmoc‑Gly‑OH，Fmoc‑Thr(tBu)‑OH，Fmoc‑Cys(Acm)‑OH，Fmoc‑Cys(Mob)‑OH，Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH，Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH，Fmoc‑Met‑OH，Fmoc‑Leu‑OH，Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH，Fmoc‑Ser(tBu)‑OH，Fmoc‑Cys(Trt)‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Ala‑OH，Fmoc‑Gly‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Gly‑OH，Fmoc‑Lys(Boc)‑OH，Fmoc‑Cys(Acm)‑OH，得到H2N‑Cys(Acm)‑Lys(Boc)‑Gly‑Lys(Boc)‑Gly‑Ala‑Lys(Boc)‑Cys(Trt)‑Ser(tBu)‑Arg(Pbf)‑Leu‑Met‑Tyr(tBu)‑Asp(OtBu)‑Cys(Mob)‑Cys(Acm)‑Thr(tBu)‑Gly‑Ser(tBu)‑Cys(Trt)‑Arg(Pbf)‑Ser(tBu)‑Gly‑Lys(Boc)‑Cys(Mob)‑NH‑Rink Amide‑MBHA树脂；程序反应步骤如下：先用20％的哌啶/DMF溶液室温处理脱去Fmoc‑保护基；再加入1～5当量的Fmoc‑保护氨基酸、1～5当量的HOBt和1～5当量的N，N‑二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时，连接Fmoc‑保护氨基酸；所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶液溶解后加入；(2).脱除Cys(Trt)的Trt保护基，进行第一次环化反应，得到一环肽树脂，脱除Trt保护基反应条件为：1％的TFA/DCM溶液中、室温反应20分钟；环化反应条件为：水、乙腈、DMSO体积比15∶10∶1的混合溶液中，pH 8，室温反应4小时；(3).脱除Cys(Acm)的Acm保护基、同时进行第二次环化反应，得到二环肽树脂，反应条件为：碘浓度为0.4mmol/ml的碘/甲醇溶液中，室温反应1～2小时；(4).脱除Cys(Mob)的Mob保护基和剩余侧链保护基，并切割树脂，得到二环肽；反应条件为：三氟醋酸、三氟甲磺酸、硫代苯甲醚、乙二硫醇体积比80∶8∶8∶4的混合溶液中，室温反应3小时；(5).进行第三次环化反应，反应条件为：二环肽溶于水中，调pH 8，双氧水存在下，室温反应1小时，反应结束后经C18填料的反相高效液相色谱柱纯化，洗脱、浓缩、干燥，得到所述齐考诺肽。