草鱼呼肠孤病毒基因工程疫苗制备方法

摘要

本发明提供了一种草鱼呼肠孤病毒基因工程疫苗制备方法，其步骤包括：采用sf9昆虫细胞增殖重组GCRV外衣壳蛋白VP5和VP7的重组杆状病毒（vAcGCRV-VP5/VP7）；经冻融裂解重组病毒感染的sf9细胞，采用蔗糖衬离心法分离重组蛋白组分，由此得到纯化的体外表达VP5和VP7蛋白复合物；通过将纯化的VP5和VP7蛋白进行鱼体保护实验，证实其具有良好的免疫保护作用。本发明制备的GCRV基因工程疫苗不仅具有良好的稳定性和免疫原性，而且对草鱼鱼苗具有良好的免疫保护作用，其免疫保护率达到90%，适于疫苗规模化大批量生产和应用。

主权项

一种草鱼呼肠孤病毒基因工程疫苗制备方法，其特征是包括以下步骤： （1）采用sf9昆虫细胞系增殖重组的GCRV外衣壳蛋白VP5和VP7的重组杆状病毒vAcGCRV‑VP5/VP7；（2）收集重组杆状病毒感染的细胞，采用离心沉淀法，去上清，得到感染重组病毒的sf9细胞；（3）在离心沉淀中加入由表面活性剂Triton‑X‑100及蛋白酶抑制剂PMSF的PBS组成的细胞裂解液，经冰浴与冻融，得到裂解的重组病毒细胞悬液； （4）采用蔗糖衬离心法，对重组病毒细胞悬液进行纯化；（5）用PBS缓冲液稀释纯化VP5和VP7蛋白复合物，制成草鱼呼肠孤病毒基因工程疫苗制剂。