发明名称 PROCEDIMIENTO DE SINTESIS DE ACIDO NUCLEICO.
摘要 Un procedimiento para sintetizar ácido nucleico que está provisto en sus extremos 3' y 5' con una región que consta de una región nucleotídica complementaria a cada región terminal en la misma cadena y que tras la hibridación de estas secuencias nucleotídicas complementarias mutuamente forma un bucle capaz de aparear bases entre ellas, en el que el procedimiento comprende: i) la etapa de hibridarse a una región F2c en un ácido nucleico que sirva como molde, una región F2 en un oligonucleótido que comprende una región F2 y una región F1c, donde F1c está unida al extremo 5' de F2, y donde F2 es una región que posee una secuencia nucleotídica complementaria a una región arbitraria F2c en el ácido nucleico molde que posee una secuencia nucleotídica específica y F1c es una región que posee sustancialmente la misma secuencia nucleotídica que la región F1c localizada en el extremo 5' de la región F2c en el ácido nucleico molde que posee una secuencia nucleotídica específica, ii) la etapa de sintetizar un primer ácido nucleico que posea una secuencia nucleotídica complementaria al molde, en la que F2 en el primer oligonucleótido sirve como el origen de la síntesis, iii) la etapa de proporcionar una región arbitraria R2c en el primer ácido nucleico sintetizado en la etapa ii) lista para el apareamiento de bases, en la que la etapa se lleva a cabo mediante la síntesis por desplazamiento de hebras de una cadena complementaria mediante una polimerasa que cataliza la reacción por desplazamiento de hebras, en la que un cebador externo que hibrida con el extremo 3' de F2c en el molde sirve como el origen de la síntesis, iv) la etapa de hibridarse a una región R2c en el primer ácido nucleico en la etapa iii), un oligonucleótido que posea una región R2 y una región R1c, en la que R1c está unida al extremo 5' de R2, y en la que R2 es una región que tiene una secuencia nucleotídica complementaria a la de la región R2c en el primer ácido nucleico que tiene una secuencia de ácidos nucleicos específica, y R1 es una región que tiene sustancialmente la misma secuencia de nucleótidos en la región R1c localizada en el extremo 5' de la región R2c en el primer ácido nucleico que tiene una secuencia de ácidos nucleicos específica v) la etapa de sintetizar un segundo ácido nucleico con dicho oligonucleótido como el origen de síntesis. vi) la etapa de proporcionar F1 en el terminal 3' del segundo ácido nucleico listo para el apareamiento de bases, en la que la etapa se lleva a cabo mediante la síntesis desplazamiento por hebra de una cadena complementaria mediante una polimerasa que cataliza la reacción por desplazamiento por hebra, donde un cebador externo, que hibrida con el extremo 3' de R2c en el primer ácido nucleico, sirve como el origen de la síntesis, y vii) la etapa de síntesis de ácido nucleico de una cadena complementaria a partir del bucle formado por hibridación intramolecular de la región F1 terminal de 3', donde la síntesis de la cadena complementaria se inicia cuando el oligonucleótido que comprende una región F2 se hibrida al bucle en el terminal 3'.
申请公布号 ES2369818(T3) 申请公布日期 2011.12.07
申请号 ES20090000525T 申请日期 1999.11.08
申请人 EIKEN KAGAKU KABUSHIKI KAISHA 发明人 NOTOMI, TSUGUNORI;HASE, TETSU
分类号 C12Q1/68;C12N15/09;C12N15/10 主分类号 C12Q1/68
代理机构 代理人
主权项
地址