一种通过体细胞胚及次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法

摘要

本发明提供了一种通过体细胞胚和次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法。本发明以龙牙楤木幼苗的叶子、叶柄和根段为外植体，在IBA浓度分别为3.0mg/L、2.0mg/L、0.3mg/L和2％蔗糖的SH培养中暗培养35天，三种外植体的体细胞胚诱导率都可达到100％，且平均每个外植体都产生较多的体细胞胚数(8.6-11.3个)。蔗糖浓度和IBA都可以影响次生体细胞胚的产生，在3.0mg/L IBA+2％蔗糖+SH培养基的培养条件下，中暗培养4周后，100％的体细胞胚上都有次生体细胞胚生成。将获得的成熟初生体细胞胚和次生体细胞胚转入无激素的WPM培养基中，都可迅速萌发生长为小苗。约5cm的健壮小苗移栽土壤中，成活率可达89％。本发明提供的培养简单、再生周期短、可持续获得再生植株的方法，可用于龙牙楤木苗木产业化生产。

主权项

一种通过初生体细胞胚和次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法，其特征在于：以萌发无菌实生苗的叶盘、叶柄、根段为外植体诱导初生体细胞胚，再利用初生体细胞胚为材料，继续诱导次生体细胞胚发生，然后使诱导的初生和次生体细胞胚萌发、生长，最后移栽到土壤中，完成植株的再生过程；所述的初生体细胞胚诱导方法为：添加2％蔗糖和IBA的SH培养基为基本培养条件下，叶盘、叶柄、根段三种外植体分别在3.0、2.0、0.3mg/L浓度的IBA培养5周，体细胞胚的诱导达到最佳；所述的次生体细胞胚诱导方法为：约1cm长的成熟初生体细胞胚在3.0mg/L IBA+SH培养基+2％蔗糖条件下培养4周，次生体细胞胚诱导最佳；所述的无菌实生苗为种子层积4个月后，选择开荚的、合子胚发育成熟的种子，在超净工作台中利用常规消毒处理后取出合子胚，接种于事先准备好的1/2MS培养基中，使胚萌发长成无菌小苗；所述的培养环境是在温度24～26℃，光照强度1000～1500Lx，光/暗周期16h/8h，湿度60％～70％。