一种克隆山羊MC4R基因编码区全序列的方法

摘要

本发明公开了一种克隆山羊MC4R基因编码区全序列的方法，包括以下步骤：A1、提取山羊眼肌组织中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；A2、引物的设计及PCR反应：上游引物在起始密码子的上游区域设计，下游引物在终止密码子的下游区域设计；设计的引物为：上游引物P1：5′-CTCTCCGCCGCCTAACTTTCGTTT-3′下游引物P2：5′-GTGCCTATAACCTGTGATGTGGAT-3′。A3、PCR产物的回收和纯化；A4、克隆。提供一种简单、快捷的获取山羊MC4R基因的完整编码区序列的方法，填补了该基因在山羊上的空白，为进一步研究山羊的该基因奠定了基础。

主权项

一种克隆山羊MC4R基因编码区全序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、提取山羊眼肌组织中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；A2、引物的设计及PCR反应：上游引物在起始密码子的上游区域设计，下游引物在终止密码子的下游区域设计；设计的引物为：上游引物P1：5′‑CTCTCCGCCGCCTAACTTTCGTTT‑3′下游引物P2：5′‑GTGCCTATAACCTGTGATGTGGAT‑3′用cDNA为模板进行梯度PCR操作扩增MC4R基因，温度为范围在50℃到65℃之间的8个温度点.PCR反应体系为10ul体系(5μL的2×Master Mix Tap，上下游引物各0.5μL，2μL的cDNA，2μL的ddH2O.)，反应条件为95℃预变性5min，37个循环(94℃，30s；59℃，40s；72℃，50s)，最后72℃10min；A3、PCR产物的回收和纯化；A4、克隆。