一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法

摘要

本发明公开了一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法。本发明克隆黄瓜花叶病毒复制酶基因cDNA片段，长308bp，位于CMV2a全长基因序列1207bp-1515bp之间，然后将该基因片段构建到RNAi高通量表达载体pHellsgate2上，再通过根癌农杆菌介导的遗传转化法将CMV2aRNAi植物表达载体导入烟草中并稳定表达，通过实验分析转基因植株的病毒抗性，最后获得对CMV抗性增强的转基因烟草植株；通过实验证实在植物中表达病毒基因片段的双链RNA能诱发RNA干涉的发生，进而产生相应基因的小干涉RNA，并特异性的抑制病毒的侵染。

主权项

一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于按如下步骤完成：(1) 从感染黄瓜花叶病毒的植物组织中克隆获得CMV 2a的cDNA片段；(2) 将克隆的cDNA片段与RNAi高通量表达载体pHellsgate2进行BP重组反应，构建CMV 2a RNAi植物表达载体；(3) 将构建CMV 2a的RNAi表达载体通过根癌农杆菌介导转入目标植物中；(4) 以重组载体T DNA上具有的抗性标记筛选转化子，并通过聚合酶链式反应获得真正的转基因植株，接种黄瓜花叶病毒，观察发病情况，最后筛选出对CMV抗性明显增强的转基因植株。