制备和构建抗各种呼吸道病毒感染的重大创新性Ab₂β抗体库的方法

摘要

这是一个可以在世界造成重要影响的重大发明项目，本发明独创的免疫学试验技术的应用目的，是为解决任何病毒或变异病毒引起人类呼吸系统急性致命性传染病的世界难题，通过制备和构建全部阻断任何呼吸道病毒(包括未知病毒或变异病毒)不同感染途径的抗体库，即全部由能够专一阻断病毒——靶细胞结合位点的特异性抗体所组成的具有特殊功能和用途的“Ab2β抗体库”，可在最短时间提供大量最有效中和性抗体，防治人类呼吸系统的任何急性病毒性传染病。特别是如H1N1流感、禽流感、SARS或生物武器等致命性疾病引起的突发事件。特别指出制备和构建该抗体库的投资非常之少(约200万人民币)，时间最多两年，各种效益却难以估量。实施该发明项目获得的“非常规”技术，在生物医学上具有重要战略意义。

主权项

一种制备和构建抗各种呼吸道病毒感染的重大创新性Ab2β抗体库的方法，其特征在于第一个实验方案：包括全方位抗呼吸道靶细胞膜表面不同表位抗体(Ab1抗体)的制备、专一筛选结合“Ab1抗体”抗原结合位点的B细胞、构建具有特殊功能和用途的初级“Ab2β抗体库”、验证初级“Ab2β抗体库”的功能和效果、病毒中和试验五个步骤：即一方面应用人呼吸道完好上皮细胞或相应癌细胞，分别免疫大量不同品系的兔子和小鼠，从中提取不同品系兔子和小鼠的抗人血清，然后用人呼吸道上皮细胞吸收其中抗体，并用新方法洗脱、提取和纯化这些抗体，本发明把这种抗体称“Ab1抗体”.另一方面应用常规免疫学实验技术，分别提取纯化大量不同人和不同品系兔子的B细胞。然后通过本发明非常简单的、独创性免疫学新试验技术，巧妙处理上述两个试验获得的人、兔子的B细胞和“Ab1抗体”，解决B细胞与Ab1抗体两者之间的相互作用关系问题，即从这些B细细中完全清除掉与“Ab1抗体”本身的抗原结合部位不能结合的任何无关的B细胞，目的是保留其它剩余的与本发明相关的B细胞。接着将保留的与本发明相关的B细胞与“Ab1抗体”混合，再通过流式细胞术(FCM)，筛选出专一结合“Ab1抗体”抗原结合部位的B细胞，即本发明所需的“Ab2β抗体”产生细胞。特别说明的是“Ab1抗体”本身既是抗体又是抗原，注意本试验的关键在于“Ab1抗体”的抗原结合部位是作为唯一抗原结合BCR‑‑B细胞的，在免役学理论与实际应用中不能忘记这一点，否则不能理解本试验——如何专一筛选出结合Ab1抗体抗原结合部位的B细胞。在上述试验基础上将能够与“Ab1抗体”抗原结合部位结合的B细胞进行体外培养，在特定的不同时间内，通过2个途径：①将体外培养的B细胞，通过噬菌体抗体库技术制备噬菌体抗体。②通过体外培养B细胞技术获得分泌性抗体。尽可能获得模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同蛋白分子不同表位(注：其中包含潜在病毒受体)的全部“Ab2β抗体″，以此构建初级“Ab2β抗体库”。然后利用特定病毒或减毒活疫苗等从初级“Ab2β抗体库”中筛选抗体，提取和纯化专一抗特定呼吸道病毒‑靶细胞结合位点的抗体，即模拟靶细胞“病毒受体”的Ab2β抗体，以此检验初级“Ab2β抗体库”的功能和效果。最后利用某些已知病毒和从初级“Ab2β抗体库”中筛选的相应特异性抗体，进行病毒中和试验，以此确证抗体的功能和效果，制备针对某些已知特定病毒的特异性中和抗体(特异性免疫球蛋白)，构建具有特殊功能和用途的“Ab2β抗体库″，