使用可分解嵌合探针实时检测食物中的沙门氏菌的方法

摘要

本发明公开了一种用于实时检测食物中和表面上的沙门氏菌的方法和试剂盒。在分析之前，在培养基中富集沙门氏菌以提高它们的密度。在叠氮化钠、蛋白酶K和清洁剂的存在下通过溶解来回收DNA。使用基因特异引物和可分解嵌合荧光探针在PCR反应中执行沙门氏菌种的实时检测。该方法还描述了内部对照以确定核酸扩增和检测的效率。该方法适用于介质和高批量分析。

主权项

一种实时检测样本中沙门氏菌的方法，该方法包括以下步骤：a)提供将要被检测的具有沙门氏菌invA基因目标DNA的样本；b)提供扩增引物对，该引物对能够退火得到沙门氏菌invA基因目标DNA，其中，扩增引物对选自于由SEQ ID NO：1和2的引物对、SEQ ID NO：3和4的引物对和SEQ ID NO：5和6的引物对组成的组中；c)提供包含能够检测的标记的探针及与沙门氏菌目标DNA基本上互补的DNA核酸序列和RNA核酸序列；d)在扩增聚合酶活性、扩增缓冲液的存在下扩增第一扩增引物与第二扩增引物之间的PCR片段，RNAse H活性和探针以及在RNA序列在探针内的情况下，RNA序列能够与沙门氏菌目标DNA的PCR片段内的互补DNA序列形成RNA:DNA异源双链体；e)检测来自探针上的所述标记的发射信号的实时增加，其中，信号的增加表示在样本中存在沙门氏菌目标DNA。