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一种新型锰矿土壤微生物修复剂的制备方法，其特征是，步骤如下：（1）分离菌株取蓖麻根际土样、水和数粒玻璃珠，加入已灭菌瓶中，置于转速为150 r/min、温度为27.5℃的摇床中振荡，取悬浮液做浓度梯度分别为10‑2、10‑3、10‑4、10‑5的菌悬液，吸取不同浓度的菌悬液于相应的马丁氏培养基中，用涂布棒涂布均匀，28℃培养箱中倒置培养；经72h培养后，观察培养基中微生物的生长情况；（2）纯化菌株采用平板划线纯化法，选取单菌落接种于Mn2+浓度为5500mg/L的马丁氏固态培养基中，28℃培养箱中倒置培养，反复划线纯化直至获得纯菌株；（3）驯化菌株将上述分离纯化得到菌株依次编号为1#、2#、3#……，分批次接种于锰浓度梯度为11000mg/L、16500 mg/L、22000 mg/L、27500 mg/L、33000mg/L的液态培养基中， 置于温度为28℃、转速为150 r/min的摇床中培养，筛选出4#菌为高抗锰的菌株；（4）制作斜面菌种将PDA培养基分装于灭菌的试管中，灭菌后摆斜面，待斜面凝固后，无菌操作接种4#菌种，于27.5℃温箱中培养，菌苔表面孢子生长丰满，呈灰绿色，并有露珠，即可取出备用；（5）摇瓶培养二级菌种采用淀粉、葡萄糖、花生饼粉、蛋白胨、硫酸铵、硫酸镁、磷酸氢二钾和水配制培养基，用10%氢氧化钠调pH值7.2‑7.4，用三个锥形瓶分装，高压灭菌，取出降温到40℃不烫手为止，接4#菌种至摇床上振荡培养，直至菌丝形成，获得菌丝；（6）发酵罐培养 采用花生饼粉、蔗糖、硫酸铵、甘薯粉、玉米粉、蛋白胨、碳酸钙配制培养基，将发酵罐消毒灭菌，然后将培养基放入发酵罐，接入菌丝，连续搅拌，保持温度28℃，通气量体积比为1∶0.5，保证发酵罐各阀门严密；培养菌丝至成熟，菌丝体粗壮，菌液黏稠有泡沫；（7）固体吸附、菌粉烘干将稻谷皮、甘薯粉、麸皮、肥土、炉灰和黄豆饼粉进行灭菌，然后采用其中的两种或两种以上的原料配制固体吸附剂，放入采用甲醛和硫磺熏蒸灭菌过的培养室，然后接种菌丝，培养4‑5天，35‑45℃烘干，得菌粉，即新型微生物修复剂。 |
