一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法

摘要

本发明公开了一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，利用具有显著抑草功能水稻新品种的根与根际琼脂浸提液能明显抑制杂草生长的特性，通过琼脂培养促使水稻成苗，从而快速获得根与根际琼脂浸提液，再利用该浸提液培养已破除休眠的稗草，观察其生长情况，测定其发芽率、根长和苗长，鉴定抑草性能，筛选出具有高抑草功能的水稻。本发明具有简单、快速、结果准确等特点，能广泛应用于抑草水稻辅助育种。

主权项

一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)水稻种子的消毒处理分别取待检测抑草性能不同的水稻种子各40粒分别装入不同的网袋中，再用1‑1.5mol/LHNO3浸泡28‑32min后，用蒸馏水洗多次，然后用8‑12％的H2O2处理10min‑20min，再用蒸馏水洗多次次后，待用；(2)水稻种子的浸种催芽将经步骤(1)消毒处理过的水稻种子，连同网袋一起浸入装有蒸馏水的大烧杯中，置于27‑30℃的恒温箱中浸种，浸种到种子即将破胸时取出，置于放有滤纸的培养皿中，并放置在27‑30℃左右的恒温箱中催芽，直到根和芽的长度约为粒长的一半左右时，停止催芽，从恒温箱中取出供试验所用；(3)培养基配制将琼脂条或琼脂粉加入到蒸馏水中，并加热煮沸使琼脂溶化，然后再分装在培养瓶里，放置，冷却，制得所需的培养基，要求：每100ml蒸馏水中，加入琼脂条或琼脂粉1.8‑2.2克，每个培养瓶中装入培养基98‑102毫升；(4)水稻培养选取步骤(2)芽已催好的不同水稻材料种子各18‑22粒，整齐排列于装有培养基的培养瓶中，置于人工气候培养箱中光照培养，培养箱中的温度为29‑30℃，湿度为74‑76％，待供试水稻长到苗期，约12天，收集供试的不同水稻根与根际琼脂各18‑22毫升，待用；(5)供试水稻根与根际琼脂提取液的制备将步骤(4)收集的根与根际琼脂分别装入另一培养瓶中，再向每个瓶中加入38‑42ml蒸馏水，让根与根际琼脂浸泡在蒸馏水中，将所有的培养瓶置于人工气候培养箱里，人工气候培养箱温度为29‑30℃，当根与根际琼脂在蒸馏水中浸泡72小时后，将培养瓶从人工气候培养箱里取出，将瓶中的琼脂搅拌均匀，再离心分离，取上层清液，得根与根际琼脂提取液，将提取液放入冰箱种保存，供生物测试用；(6)提取液的生物检测选取步骤(5)提取的不同水稻的根与根际琼脂提取液各9‑10ml，放入装有滤纸的不同培养皿内，每皿放50粒稗草种子，以蒸馏水为对照，将培养皿放入人工气候培养箱(温度29℃，湿度75％)，每隔24小时记录萌发情况，5天后，测量每皿的发芽率、根长、苗长，试验设3个重复；(7)统计分析与数据处理所有数据用SPSS17.0软件进行分析，获得的原始数据均转化为抑制指数IR(inhibitory rate)，作为化感作用指标进行统计分析，数据取平均值，按(1)式计算抑制率：A＝(1‑B/C)×100％              (1)式中，A‑抑制率(IR)，B‑处理组稗草的发芽率或根长或苗长，C‑对照组稗草的发芽率根长或苗长，IR＞0为抑制作用，IR＜0为促进作用。