一种农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株的方法

摘要

本发明涉及一种农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株的方法，是利用农杆菌介导法将目的基因构建到植物表达载体pBI121上，然后转化根癌农杆菌LBA4404，侵染黄瓜，进而得到转基因黄瓜植株。主要包括以下步骤：外植体准备、预培养、侵染及共培养、选择及分化培养、生根培养等步骤，通过PCR鉴定所得株系是否呈阳性，再通过RT-PCR检测所得株系的表达情况，进一步确定获得转基因黄瓜植株。本发明是针对农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株，具有外植体易得、再生和转化频率高、操作简单等优点，为创建黄瓜新种质提供新途径。

主权项

一种农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株的方法，其特征在于包括以下步骤：1）选取6~7 d苗龄、两片子叶张开呈竖直状态的无菌黄瓜幼苗，切取连带下胚轴2 mm子叶，去除生长点，从下胚轴处纵切为二，切除子叶末端1/3部分，并切除叶缘得到外植体子叶节；将子叶节平铺于分化培养基MS + 1.5~1.7 mg·L‑1 6‑BA上置于黑暗中进行预培养2 d；2）把经过预培养的子叶节浸没在农杆菌悬浮液中 15~20 min；侵染结束后用无菌纸吸干子叶节表面残留的菌液，将子叶节置于分化培养基MS + 1.5~1.7 mg·L‑1 6‑BA上置于黑暗中进行共培养2~3 d；3）共培养结束后，用含有250 mg·L‑1 Cb的液体 MS 培养基洗净外植体表面农杆菌，用无菌纸吸干子叶节表面的液体；4）将上述处理好的子叶节接种到分化及选择培养基MS + 1.5~1.7 mg·L‑1 BA  +100~150 mg·L‑1 Kan + 250 mg·L‑1 Cb上进行芽诱导培养不定芽；待不定芽长至1.5~2 cm 高时，将其从子叶节基部切下，接种到生根培养基MS + 50mg·L‑1 Kan上进行生根培养；当不定芽基部产生大量须根，逐步开启封口膜，炼苗一周后移栽入土。