重组融合蛋白质在快速诊断检测中的直接应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，基于目前国内外抗体快速检测领域普遍存在的抗原水溶性差、检测信号弱、灵敏度低、特异性差等问题，本发明提出直接采用携带融合标签的整体融合蛋白质进行分析物的平面流动型快速检测。1.本发明的要点是：构建融合蛋白重组基因；表达并纯化重组融合蛋白质；用重组融合蛋白质制备检测试剂和捕获试剂。2.本发明显示，融合蛋白质具备水溶性好、易于纯化、具备天然构型、活性高、标记效率高等优点，由此制成的快速检测试剂灵敏度和特异性高。3.根据本发明组建的快速检测试剂能够检测一种或者同时检测两种分析物。4.本发明在疾病诊断、流行病普查、医学鉴定、新药研制、农牧兽医等应用和基础研究领域具备广阔的应用前景。

主权项

一种直接应用重组融合蛋白质进行分析物快速检测的方法，其特征在于：(1)构建融合蛋白质编码基因：将编码用于捕获和检测分析物的蛋白质编码序列、短小多肽标签和较大融合蛋白质DNA序列用重组DNA技术构建到一起，形成携带双重标签(短小多肽标签和较大融合蛋白质标签)的融合基因，克隆到表达载体。(2)制备融合蛋白质：根据表达载体特点，诱导表达产生重组融合蛋白质。用针对短小多肽标签和较大融合蛋白质的亲和层析材料纯化重组融合蛋白质。(3)制备检测信号试剂：用生物素标记融合蛋白质，用胶体金标记能够特异识别生物素的蛋白质，共同组成检测信号试剂；或者采用胶体金标记融合蛋白质，作为检测信号试剂。(4)制备快速检测测试条：直接用未标记的融合蛋白质在反应平面介质上点印形成检测线；用能够与检测信号试剂特异结合的试剂在同一反应平面介质上点印形成质量控制线。根据检测信号试剂的不同，点印质控线的试剂可以是用生物素标记的常用蛋白质例如BSA，也可以是针对检测试剂的抗体。(5)组装快速检测装置：将上述检测信号试剂、快速检测测试条、吸水纸、支持平板和塑料外壳等组装产生快速检测装置。(6)检测：加入待测样本，根据检测线和质控线的反应，确定检测结果。