细胞-组织培养大规模生产膏桐植株的方法

摘要

细胞-组织培养大规模生产膏桐植株的方法，属植物种苗的培养技术。步骤：1、细胞悬浮培养：将膏桐组织研磨后接种，加入细胞悬浮液体培养基：MS+6-BA 0.2～0.5mg/L+NAA 1～6mg/L+LH 0.5～1.5mg/L+蔗糖19～22g/L；2、细胞生长测定；3、丛芽增殖培养：选生长进入静止期的细胞，接入丛芽增殖培养基：MS+6-BA 0.1～1mg/L+NAA 0.1～1.5mg/L+蔗糖20～30g/L；4、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养：MS+NAA 0.1～1mg/L；5、出瓶栽培。有益效果：本发明将膏桐细胞培养和组织培养有机的结合，周期短、成本低，为膏桐的人工繁殖、脱毒苗生产、培育优良品种提供了一种高效途径，对膏桐的开发利用具有良好前景。

主权项

一种细胞‑组织培养大规模生产膏桐植株的方法，其特征是包括以下步骤：(1)、膏桐外植体的选取及培养：选取膏桐茎段，用洗洁精洗干净后，在流水下冲洗10min，然后转到洁净工作台上，吸干水分，先用体积比70％酒精灭菌30秒，再转入0.1％的HgCl2溶液中灭菌5分钟，无菌蒸馏水冲洗5次，将茎段剪成1cm长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基MS+6‑BA 2mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L，用质量比0.8％琼脂固化，高温灭菌前PH调为5.8，培养温度25℃，外植体接种20天后可见明显芽；(2)、膏桐细胞悬浮培养：将芽研磨后接种，加入1～3倍重量的细胞悬浮液体培养基，容器放入旋转式摇床，于温度25±2℃，黑暗条件下进行膏桐细胞悬浮培养2～4天，摇床转速为80～130r/min，细胞悬浮液体培养基是：MS+6‑BA 0.2～0.5mg/L+NAA 1～6mg/L+LH 0.5～1.5mg/L+蔗糖19～22g/L，PH值5.8～6；(3)、对培养的膏桐细胞进行细胞生长测定；(4)、丛芽增殖培养：选取生长进入静止期的膏桐细胞，接入固体的丛芽增殖培养基，光照强度1000～2000LX，丛芽增殖培养基是：MS+6‑BA 0.1～1mg/L+NAA 0.1～1.5mg/L+蔗糖20～30g/L，用质量比为0.5％～0.8％琼脂固化，PH值5.8～6，培养时间为15～20天；(5)、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养基进行生根培养，最后生产出膏桐苗，生根培养基是：MS+NAA 0.1～1mg/L；(6)、出瓶栽培：出瓶栽培的苗先保湿15～20天，保持温度不低于17℃。