一种通过AGT基因拷贝数预测高原肺水肿发病风险的试剂盒

摘要

本发明涉及一种通过AGT基因拷贝数预测高原肺水肿发病风险的试剂盒，包括分离包装的AGT引物混合液，Beta-actin引物混合液，PCR反应液，无菌去离子水，定值标准品，健康对照DNA，其特征是，所述的AGT引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：F：5′-GCCGTTTCTCCTTGGTCT-3′和R：5′-GCAAGACGTTTATTACTAACACAAG-3′；所述的Beta-actin引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：F：5’-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3’和R：5’-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。本发明能用于平原人进入高原前对高原肺水肿易感者的筛选，指导高原肺水肿的预防和治疗，有利于进入高原人群健康；该试剂盒使用简单，操作方便，检测快速。

主权项

一种通过AGT基因拷贝数预测高原肺水肿发病风险的试剂盒，包括分离包装的AGT引物混合液，Beta‑actin引物混合液，PCR反应液，无菌去离子水，定值标准品，健康对照DNA，其特征是，所述的AGT引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：F：5’‑GCCGTTTCTCCTTGGTCT‑3’和vR：5’‑GCAAGACGTTTATTACTAACACAAG‑3’；所述的Beta‑act in引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：F：5’‑CGGGAAATCGTGCGTGACAT‑3’和R：5’‑GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG‑3’；所述的PCR反应液，含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、SYBR染料、Ex Taq酶；用Beta‑actin的上下游引物在PTC‑200PCR仪中进行目的片段的扩增，得到含有目的片段的PCR产物，然后将目的片段插入克隆载体pMD18‑T中，并将阳性克隆增菌后测序验证；从证实含Beta‑actin基因片段的菌液中提取质粒作为定值标准品；所述的定值标准品用无菌去离子水倍比稀释为5管，每管体积200μl，浓度分别为1×104、1×105、1×106、1×107、1×108拷贝/μl；所述的健康对照DNA是从拟进入高原前的人员的静脉血中提取的白细胞DNA，并且该人员到高原后在一周内没有发生高原肺水肿，DNA浓度为50ng/μl；所述的AGT引物混合液为100μl；其中上游引物和下游引物各50μl，浓度均为10pmol/μl；所述的Beta‑actin引物混合液为400μl；其中上游引物和下游引物各200μl，浓度均为10pmol/μl；所述的无菌去离子水为1500μl。